• Santé - Western, Migration, Protéines

denaturalisation protéines

L'urée est surtout utilise pour solubiliser les protéines. Certaines protéines forment des corps d'inclusion (aggrégation de protéines) lorsqu'elles sont surexprimées, si on veut les purifier on les solubilisent en ajoutant de l'urée ou du chlorure de guanidium.  [...] Dénaturer les protéines est également utile lorsqu'on fait un western blot. la migration dépendra uniquement de la masse moléculaire, et non du repliement dans l'espace.  [...]

pH d'une solution protéique et Western-blot

Si je fais migrer cette solution acide dans mon gel de Western-blot, est ce que cela aura un impact sur la migration Le pH change la conformation des protéines mais est ce que cette dénaturation () aura un impact sur la migration/transfert et/ou révélation.  [...] Pas étonnant, si c'est un Laemmli (conditions dénaturantes) c'est le SDS qui forme des patchs sur la protéine et la fait migrer. Et si le pH est trop acide, la charge peut ne pas être suffisamment négative pour obtenir une bonne migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western et révélation bandes

Le but de ce western est de localisé la ferroportine en comparant deux gels polyacrylamide. La migration de chaque échantillon étant réalisée dans 1 cas avec des protéines extraites de cellules non traités et dans l'autres cas avec des échantillons traités à l'hepcidine.  [...] autres questions, si l'on ne voit pas les 3 dernières bandes cela est dû a un temps de migration trop long (et les bandes vont trop loin) ou c'est parceque le gel n'est pas assez concentré merci.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Je cherche le moyen d'optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire. Je travaille sur FAS (274kDa) et je n'arrive pas à la transférer.  [...] Avant de s'attaquer au transfert, êtes-vous sûr, dans un premier temps, que les protéines de cette taille rentrent dans le gel dans vos conditions de migration.  [...]

Quel test statistique utiliser?

Ensuite tu parles de comparer des western blot, qu'est ce que tu veux comparer une intensité de marquage une distance de migration (vu que tu dis regarder des niveaux de protéines j'en déduis que c'est des intensité de marquage, mais bon ce n'est pas super explicite tes données).  [...] En règle générale, pour mettre en évidence une différence d'expression par western, on utilise une protéine dont l'expression est connue et dont on sait qu'elle ne changera pas lors d'une transfection.  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Il y a la théorie mais après il y a la pratique. Moi sur mes Western, quand je regarde ma protéine, j'ai deux bandes. une qui est la forme normale, une autre très légèrement au-dessus qui est la forme hyperphosphorylée...La phosphorylation retarde la migration électrophorétique, c'est illogique car, comme tu l'as dit, le phosphate apporte deux charges négatives.  [...] Non pas à ma connaissance. Pour mes protéines après migration à 80V dans le stacking et 130V dans le separating, je transfère en liquide pendant 1h30 à intensité fixe 350 mA, puis les autres étapes sont inchangées par rapport à d'autres westerns sur d'autres protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Régulation de NFAT5

Donc l'idée est de faire une immunoprécipitation des protéines ubiquitinilées. Puis un western anti ubiquitine permet de voir l'ensemble des protéines précipitées. Ensuite, sur le même extrait on fait un western anti NFAT5 afin de savoir si il fait partie des protéines précipitées.  [...] ce processus est utilisé pour la dégradation de protéines mal repliées ainsi que pour la dégradation de protéines dont la durée de vie est limitée, telles que celles impliquées dans la séquestration cytoplasmique de facteurs de transcription (exemple. I kappa B).  [...]

western-blot

je suis entrain de faire des western sur des mutants afin de voir la différence d expression d une protéine dans ces lignees. Or je suis obligé pour cela de précipiter mes protéines sinon je n ai pas les quantites suffisantes.  [...] Je fais également des western blot et j'ai le même problème que toi. je resuspend mes protéines directement dans le tampon de charge donc je ne peux pas quantifier la quantité de protéines que je dépose sur gel.  [...]

Sds-page

Oui tout à fait. Le SDS est un dénaturant protéique selon la concentration. Il joue un double rôle dans la migration en SDS-page. dénaturer et charger les protéines.  [...] En cas de westernblot on utilise souvent une concentration plus faible en SDS afin de l'éliminer rapidement au lavage et redonner une configuration native (ou presque) aux protéines.  [...]

delai depistage vih

Mais bon si le test WB des protéines virales HIV est négatif ( si il a bien été fait ) normalement ça c'est fiable, m'enfin retourne comme dit, voir des gens qui seront à même de te dire si oui ou non c'est négatif.  [...] Il aurait fallu qu'elle fasse un test hiv à 6 semaines de sa dernière prise de risque afin d'être sûr qu'elle est séronégative et ainsi continuer à avoir des relations non protégées avec (même si je suis avec le fait de rester protégé...).   [...]