• Santé - Volume, Expérience, Quantité, ADN

Préparation d'ADN plasmidique

Calculer le volume V qui a été utilisé au début de l'expérience pour préparer une quantité totale de 10ug d'ADN plasmidique dans 1mL.  [...] 1unité de DO=10^9bactéries. l'ADN est plasmidique. temps de regénération de la culture =37min. taille plasmide=2,7kb. taille d'une bactérie=1*0,4um². nombre de copies du plasmide dans la bactérie=500. nombre avogadro=6.10^23.poids moléculaire d'un nucléotide=330.  [...]

Estimation concentration gel agarose

Pour connaitre la concentration il faut utiliser un spectrophotomètre micro-volume (type Nanodrop), c'est la seule façon de réellement connaitre la quantité d'ADN présent.  [...] Cependant, avec l'expérience tu peux deviner approximativement en regardant l'épaisseur de la bande (a force d'en avoir vu par centaines),  [...]

[Biochimie] Calcul de la vitesse maximale

Calculer pour chaque courbe, la vitesse maximale. Elle représente la vitesse initiale Vi de la réaction. Cette Vitesse est définie comme la quantité de produit formé (ou de substrat utilisé) par unité de temps. Pour l'expérience présentée, elle sera donc exprimée en % d'O2/sec.  [...] Vous avez donc avec Exao tracé l'évolution de %O2 en fonction du temps, experience répétée avec des qtés de substat différentes (lié à un volume d'eau oxygénée différent et donc d'une quantité d'O2 différentes).  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

On peut alors dire combien il y a d'ADN dans la bande du puits 1 ou 3 de même intensité, et sachant quel volume on a déposé dans le puits, on peut alors savoir quelle concentration on avait dans le tube, et donc la quantité d'ADN qu'on avait à la sortie de la PCR.  [...] Pour la quantité c'est un peu plus compliqué. Tu sais la quantité d'ADN (marqueu) que tu as déposé sur ton gel (le prof a vous la donner). pour le reste ce que tu as expliqué est bon.  [...]

échantillons d'adn

Après ca dépend de ce que tu veux faire dans ton roman de cet ADN. Si c'est pour du génotypage (ca doit pas être vendeur comme sujet de roman), vaut mieux stocker l'ADN dans ces tubes à une concentration de 20 ng/µL par exemple. Si c'est pour raconter un truc du genre ils stockent de l'ADN pour cloner des gens 10 ans plus tard, là je peux pas t'aider.  [...] Selon la quantité de cellules dont tu disposes à l'origine, il existe différents kit d'extraction (de marque QIAGEN pour faire de la pub ) et permettant d'obtenir un volume d'environ 40 microlitres par patient. L'ADN est une molécule relativement stable. Tu peux les garder à -20°C sans que ca ne s'abime.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN génomique

Et mon grand problème est que j'arrive pas à digérer une grande quantité d'ADN(200 Ml dans un volume de 500 Ml)mais dans un petit volume(10Ml dans 15Ml)j'arrive à digérer mon ADN...(concentration d'ADN est 400 ng/Ml).  [...] Sensible à la méthylation des CpG. Donc ça ne vient pas de là son problème. Et de toute manière le souci c'est que ça fonctionne dans un petit volume et cela ne fonctionne plus dans un plus gros volume.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage en plasmides de grande taille via Sfi I (astuces)

Rapport vecteur.insert 1.10 ok mais tu utilises quelle quantité exactement d'ADN Et tu transformes avec quelle volume de ta ligation (pour quel volume de bactéries ).  [...] la digestion je la fais géneralement avec 1,5 µl d'enzyme 1Hà 37°C. mais comme le signal obtenu après dépos sur gel est trop faible, j'ai augmenté la quantité d'ADN digeré (80µL dans 350 final) avec 5µl d'enzyme de digestion 1h 37°C(j'ai essayé d'amplifier le fragment par pcr, ça ne marche pas).  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

A partir du moment ou la spécificité de ton amplification d'ADN champignon est avéré, il me semble que tu peux en conclure que ton échantillon est positif pour ce champignon. même en faible quantité, ce dernier est présent et se multiplira de toute façon.  [...] Le nombre de copie permet de revenir à une sorte d'unité internationale, car à partir des conditions expérimentales qui peuvent varier d'un manipulateur à l'autre (quantité d'ARN de départ, conditions de qPCR, mix utilisés etc...) les Ct peuvent varier. Après une normalisation par un gène de ménage défini et/ou l'utilisation d'une gamme étalon, on s'affranchit de ce genre de problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

J'utilise la Taq de invotrogen, mais dans leur protocol ils prennent un volume total de 100 microlitres, cependant pour le template ils disent juste 1-20 microlitres, (ce qui en soi est une fourchette assez élevée) et ne donnent pas d'indication sur la quantité d'ADN en ng optimale a prendre,  [...] j'ai essayé d'augmenter la concentration finale de MgCl2 comme dans le cas de non-produit ca peut etre du a une trop faible quantité de Mg, ducoup jsuis passé de 1.5 a 2.5 (meme si 1.5mM devrait etre suffisant normalement) j'ai aussi augmenté ma quantité de dNTP qui etait 5x inferieur a ce qui était préconisé de 0.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise au point des conditions PCR

*Pour 10% de mes gènes environ, je n'ai pas d'amplification. J'ai essayé différentes méthodes. augmentation du volume de réaction, diminution de la quantité d'ADN, baisse du Tm de 58 à 56°C. Rien n'a fonctionné, je cherche donc d'autres méthodes qui pourraient améliorer mes conditions PCR.  [...] *Enfin, pour certains de mes amplicons, le gel n'a permis de ne visualiser qu'une seule bande nette, cependant au séquençage (GATC), j'obtiens des séquences pourries, quelqu'un a-t-il une explication.   [...]