• Santé - Vecteur, Clonage, Fragment

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

svp quelle est la difference entre le vecteur de clonage et le vecteur d'expression à part que l'un a un promoteur et pas l'autre.  [...] Vecteur de clonage. Destiné à isoler physiquement un fragment d'ADN et à amplifier le nombre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs navette

Vecteur de clonage. est un plasmide ayant une réplication autonome dans la cellule hôte et un site multiple de clonage afin de cloner un fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Vecteur d'expression. Destiné à transférer un gène et le faire exprimer dans une cellule hôte qui n'est pas sa cellule d'origine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

Une question simple. j'aimerais cloner un gène dans un vecteur pENTR. J'ai la séquence codante de ce gène dans un autre plasmide, je compte donc l'amplifier par PCR en rajoutant des sites de restrictions en 5' et 3' qui me permettront ensuite de le mettre facilement dans mon pENTR d'intérêt.  [...] Ce que je fait en général, c'est de cloner la séquence amplifié avec la présence des sites de restriction dans un vecteur de clonage pour fragment PCR. Ceci permet d'avoir des morceau d'ADN de part et d'autre des sites de restriction. Je clone ensuite le fragment dans mon vecteur d'expression.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr/clonage

Est ce qu'on fait la PCR apres avoir inseré les fragments d'intérets dans les vecteurs,ou est ce qu'on amplifie par PCR les fragments d'intérets qu'on insere ensuite dans le vecteurPour moi la PCR est une technique de clonage,donc si on connait la séquence qu'on veut cloner,une PCR est suffisante,il n'y a pas besoin d'utiliser de vecteurs apres.  [...] La PCR va permettre d'isoler et amplifier un fragment d'intérêt qui va ensuite être intégré dans un vecteur. Lorsqu'on fait un clonage ou un sous-clonage, on souhaite exprimer ce fragment qui dans la plupart des cas correspond à l'ADNc codant une protéine ou une partie de la protéine.  [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

Dans un vecteur de clonage, on trouve un gène LacZ qui produit la béta galactosidase. En présence de X-gal, la béta-galactosidase produit un composé de couleur bleue. Pour que cette coloration soit active, il faut que le gène de LacZ soit intact. Or le site de clonage du fragment se trouve en général au milieu du gène LacZ.  [...] merci pour les explications,alors lorsqu'on fait le clonnage dans le vecteur bleusxprit(cotennent le gene lacZ)il faut ajouté de l'IPTG (qui est un inducteur non metabolisable de l'opéron lactose)ce dernier induit la formation du beta galoctosidase,  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

Je commence actuellement une construction pour generer un nouveau modele de souris transgenique. J'en suis seulement a la construction du vecteur et je me pose la question suivante. Je dois effectuer un clonage d'un fragment d'environ 700pb dans un plasmide au niveau d'un site EcoRI.  [...] Merci beaucoup. Et apparemment le traitement a la CIP de mon vecteur n'empechera pas la ligation evec l'insert de s'effectuer car il me semble que la ligase T4 peut liguer des terminaisons phosphorylees (celles de mon insert) aux terminaisons non phosphorylees (de mon vecteur).  [...]

Clonage dans un vecteur

bonjour. je voudrais savoir comment peut-on augmenter l'efficacité du clonage des fragment d'ADN d souris dans les vecteurs.  [...] On pourrait presque dire que chaque clonage est différent. il y a pas mal de paramètres à prendre en compte. taille de l'insert, taille du plasmide, technique de transfo, conditions de ligation (ratio insert/vecteur, température, durée, Unités de ligase, bouts francs, cohésifs), etc. etc.etc.  [...]

Comment orienter un fragment d'adn dans un vecteur

On veut introduire ce fragment dans un vecteur contenant lui un promoteur, mais pour cela il faut le mettre dans le bon sens pour que l'ORF soit dans le bon sens par rapport au promoteur.  [...] L'utilisation de sites de restriction est le seul moyen pour faire cela. Une autre solution est de ne pas orienter le fragment, et une fois le clonage fait tester les plasmides pour trouver ceux qui auront un insert dans le bon sens. Apres tout tu as 50% de chance que ton insert soit dans la bonne orientation.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN complémentaire et PCR

3) Si nous avons un vecteur recombinant avec un fragment d'intéret et que nous souhaitons amplifier par PCR uniquement ce fragment d'intéret. en utilisant 2 amorces spécifiques des extrémités de ce fragment, faut-il.  [...] d'abord linéarisé le vecteur par un autre enzyme ou meme en le laissant circulaire, on ampliefiera seulement le fragment.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.  [...]