• Santé - Utilisation, Tampon, échantillons, Origine, Extraction

[Biochimie] Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisé du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montrent que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] La force ionique est un parametre essentiel pour le decrochage de l'ADN des colones, donc oui avec un TE10X tu as toute les chances que l'ADN soit encore dans la colone.   [...]

Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisée du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montre que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] il y a une section biologie dans le forum, ta demande y serait mieux placée.   [...]

TE dans phenol-chloroforme

En général comme tu dis, celui que l'on achète est déjà à pH d'utilisation, et en général est vendu à pH 7,9 saturé avec le tampon qui va bien, pour une utilisation d'extraction d'acide nucléique.  [...] salut. oui j'extrait l'ARN du sol. Et apparemment l'acétate de sodium et à pH5 si on fait le tampon avec l'acide acétique, je pense que je vais faire ça, merci beaucoup pour votre reponse.  [...]

[Physiologie] Conservation de la matière fraîche

Il faut que tu te demandes aux gens de ton labo, qui recoivent des produits envoyés par les fournisseurs dans de carboglace, à ne pas le jeter. Tu le récupères et tu le mets en chambre froide jusqu'à la veille de ton départ par exemple où tu mettras ton échantillons bien protégé dedans.  [...] - Sinon, tu broies tes échantillons en poudre et tu les mélanges avec le tampon d'extraction. Tu les transportes alors en tubes à température ambiante. Pour les acides nucléiques ça ne risque pas grande chose mais pour les protéines, je ne sais pas. Je ne l'ai jamais fait.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

2. D'où 2ème problème. il peut arriver que l'efficacité de la PCR soit différente entre la PCR sur la gamme standard et la PCR sur l'échantillon. Notamment si les conditions/méthodes d'extraction d'ADN sont différentes, tu peux avoir des contaminants différents qui vont influer différement sur l'efficacité de PCR, et donc l'utilisation de la gamme standard sera un peu faussée.  [...] DONC. tout dépend de la précision requise, du type de matrice (ADNc, ADN génomique,...), de l'origine des échantillons (végétal, animal, bactérien) et de la qualité d'extraction des acides nucléiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

J'ai bien pensé au problème de la lignée mais j'ai re-analyser des échantillons pour lesquels j'avais un bon résultat il y a quelques mois et je n'ai obtenu qu'une bande alors que je devrais en avoir 2 pour certains, et j'ai utilisé l'ADN issu de la même extraction donc je ne pense pas que ce soit ça.  [...] Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Quels sont les meilleures conditions pour l'extraction et pour voir une différence de phosphorylation en western blot.  [...] Pour l'extraction, si tu veux conserver les phosphorylations de ta protéine, il faut de l'orthovanadate de sodium (inhibiteur de phosphatase) dans le tampon et éventuellement d'autres inhibiteurs. Mais surtout garder les échantillons dans la glace le plus possible une fois l'extraction faite, cela limite d'autant plus les déphosphorylations.  [...]

[Biochimie] migration sds page

je fais une extraction de cytosol total sur des plaquettes sanguines et je les dénature en les faisant bouillir avec un tampon glycérol/SDS avant de les faire migrer.  [...] alors voila, je prépare 60 millions de plaquettes (volume de 200-400µl). après traitement je fais une extraction du cytosol total grâce à un kit Active Motif. Ensuite je dénature 5µg de protéines (environ 10µl) par 5µl de tampon de charge (5min à 100°C). je fais ensuite migrer mes échantillons dans un gel 10% pendant environ 2h, grâce à une système Apelex (cuve + générateur).  [...]

Réactifs de biomol

Temps que j'y suis, les colonnes d'extraction d'acides nucléiques sont des colonnes échangeuses d'ions, c'est bien ça Dans ce cas, je ne me souviens plus par quel mécanisme se fait l'élution des acides nucléiques (tampon contenant une faible concentration en sels dixit Mme la Notice d'Utilisation).  [...] Maintenant je cherche à comprendre comment l'élution des AN s'effectue. dans la composition de mon tampon d'élution (compris dans le kit ) ils insistent sur le fait que la concentration en sels diminue. Donc j'imagine que c'est cette diminution de concentration en sel qui permet l'élution des AN, mais par quel mécanisme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Pour l'extraction d'ARN, la contamination vient bien du fait que j'ai utilisé du tissu congelé (jeté dans le tampon RLT à 20°C). Le commercial m'a conseillé de chauffer les échantillons juste 5 min à 30°C après broyage puis de bien vortexer pour dissoudre les sels.  [...] Tous mes échantillons (en même temps il n'y en a que 4) ont une DO280 équivalente, mais ce n'est peut-être pas qu'un coup de bol. J'ai mis au point un protocole de prélèvement hyper standardisé, et l'extraction se fait sur colonnes RNeasy (à priori pas trop de variabilité possible là non plus).  [...]