• Santé - Utilisation, Anticorps, Protéines, Intérêt

Définition | Microscopie de super-résolution dynamique | Futura Santé

Le microscope de super-résolution est une nouvelle génération de microscopes, appelés nanoscopes. La microscopie de super-résolution dynamique fait partie des techniques de microscopie de super-résolution, avec les techniques.   [...] Il est possible de suivre un mouvement moléculaire, grâce à l'utilisation d' anticorps fluorescents dirigés contre des protéines d'intérêt. S'ils sont assez dilués, les anticorps ne vont marquer que quelques protéines isolées, et il sera alors possible de les suivre à une vitesse de 20 images par seconde.  [...]

[Biochimie] Correspondance entre 37°C et 4°C

Par exemple, si le réactif est fluorescent, tu as de grande chance que la durée de vie du fluorophore soit le plus important. Si le ráctif est une proteine, les protéases auront une importance primordiale.  [...] Pour les réactifs il y a des protéines pour certains et j'ai commencé à m'intéresser aux protéases surtout pour une autre stabilité, celle d'anticorps (pour avoir un étalon stable après utilisation). Il faudrait que je teste dessus l'effet d'anti protéases (ou anti peptidases) mais je ne sais pas trop laquelle choisir.  [...]

Western Blot et coomassie

en fait on colore au bleu de coomassie toutes les protéines du gel. Si c'est une protéine purifiée, ou une protéine produite in vitro, ça peut suffire puisqu'elle sera largement majoritaire. Sur un lysat cellulaire par exemple c'est plus difficile puisqu'il y a des milliers de protéines différentes mélangées, et dans ce cas un bleu de coomassie n'apporte pas grand chose (a part pour avoir un profil, une mesure globale de quantité, etc.).  [...] Le western blot utilise pour révéler la protéine des anticorps spécifiques. On a donc deux (meme trois) informations. la taille, la quantité et la qualité. si vous détectez votre protéine vous êtes sur que c'est bien elle, pas d'usurpation possible. C'est une information de spécificité.  [...]

[Biologie Moléculaire] ChIP on chip

On peut utiliser la technique ChIP on Chip pour identifier les interactions protéines - ADN. Je me pose quelques questions quant à l'utilisation de cette méthode. Une fois qu'on obtient nos séquences d'ADN où étaient fixées nos protéines d'intérêt fait-on une PCR ou on peut hybrider directement sur la puce Quelles séquences sont utilisées sur notre puce (des facteurs de transcription) afin d'hybrider nos séquences qui contenaient nos protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

Je ne comprends pas bien. On peut tout à fait faire un western avec SDS et utiliser un anticorps couplé à la péroxydase. Le SDS agit pendant la migration mais une fois que les protéines sont sur la membrane, il n'y a plus de SDS et si il en reste il disparaît avec les lavages donc aucun problème pour la péroxydase (et d'ailleurs intuitivement ça coule de source car les anticorps que vous allez utiliser, avant la péroxydase, nescessitent leur conformation 3D ce qui prouve que le SDS ne bouleverse pas la manipe une fois que l'on est sur la membrane).  [...] Maintenant vous pouvez tout à fait faire un gel non dénaturant sans SDS si vous voulez garder la conformation native des protéines et conserver les complexes, mais cela n'a rien à voir avec l'utilisation ultérieure d'un anticorps couplé à la préoxydase.  [...]

protéines ribosomales

Ben ca veut dire que les protéines ribosomales sont synthétisées dans le cytoplasme attachées au RE, puis importer dans le noyau pour participer à l'assemblage du ribosome.  [...] Si elles vont autre part elles ne servent à rien, donc c'est de l'énergie et des constituants gaspillés, chose hautement peu recherchée dans une cellule. D'où l'intérêt de pouvoir orienter les protéines vers le lieu de leur utilisation. C'est plus économique.  [...]

OGR : mise au point des premières bactéries génétiquement recodées

Grande découverte dans le champ de la génétique bactérienne. l'ADN d'une souche d' Escherichia coli a été recodé pour donner naissance à des protéines inédites, conférant à l'unicellulaire une meilleure résistance aux infections virales. Ces propriétés des OGR (organismes génétiquement recodés) pourraient être utilisées dans les biotechnologies pour outrepasser les limites actuelles des OGM.  [...] Mais l'utilisation des OGM est limitée par d'autres contraintes, deux principalement. Les bactéries fabriquant des protéines d'intérêt sont souvent victimes de virus, ce qui limite la production. D'autre part, par transfert horizontal, ces gènes particuliers peuvent circuler, intégrer et ainsi contaminer le génome d'autres organismes, et se répandre dans la nature.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur de clonage et autre sur le web

Naviguant sur le web,je me demandais si il n'existerait pas des sites proposant des vecteurs de clonage ou de transfection utilisés dans la biologie moléculaire(de par la je veux dire rétrovirus ou adénovirus (totalement inoffensif pour l'homme ))ou plus hasardeusement des souches microbiennes servant a l'extraction plasmidique car je vous l'admet pour l'instant mes recherches se révèlent fort laborieuses,aussi en votre aide j'espère m'extraire de ce pénible problème.   [...] Classiquement pour ce genre d'expérience, on utilise les souches E. coli DH5 alpha pour l'amplification d'un plasmide d'intérêt (elles sont faciles à transformer), et pour l'expression de protéines recombinantes, ce sont plutôt les E. coli BL21. Il existe des variantes bien sûr mais ce que je veux dire c'est que suivant l'utilisation que tu compte faire, les outils à choisir seront différents.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Pour l'instant j'amplifie mon plasmide dans une souche de Coli DH5alpha. Instinctivement (après mes aventures dans le monde de la production en pET) j'allais passer sur une souche BL21 peu pratique à utiliser. Puis réflechissant un peu je me suis rendu compte que finalement la souche BL21 n'a surtout d'intérêt pour la production de protéines en pET que parce qu'elle permet l'utilisation du promoteur T7 du plasmide.  [...] Pour l'anticorps c'est un anticorps polyclonal commercial dirigé contre ma protéine et qui fonctionne pas mal dans les autres applications pour lesquelle je l'utilise. En revanche ce dont je suis à peu près certain c'est spécificité de ce WB. J'ai co-migré de l'extrait protéique non transformé et la colonne reste totalement vide.  [...]

Problème de biologie moléculaire

pour un EMSA, il faut une sonde ADN, donc savoir un minimum sur quoi peut s'accrocher votre protéine. Il faut mieux définir votre expérience. Protéine produite + ADN +/- extraits protéiques Vous avez un anticorps contre votre protéine pour faire un super shift et si l'interaction n'est pas directe Dans ce type d'expé, une interaction ne suffit pas pour dire que c'est un FT, de la même façon que l'absence d'interaction ne suffit pas pour dire que ce n'en est pas un.  [...] On aura un ladder pour l'ADN non mélangé à l'extrait nucléaire et un ladder avec une absence d'échelons au niveau de l'interaction protéine/ADN. L'énoncé ne précise pas l'utilisation d'anticorps pour provoquer ce super-shift. Mais c'est envisageable, la question est ouverte.  [...]