• Santé - Travail, Enzyme, Digestion

[Biochimie] enzyme de digestion-restriction

On parle d'enzyme de restriction. Elle reconnaît spécifiquement des séquences d'ADN appelés site de restriction et induit une digestion de l'ADN.  [...] En PFGE, on peut parler d'enzyme de macro-restriction puisqu'elle génère des macro-fragments d'ADN (de + de 50 kb) résolus par électrophorèse en champs pulsé.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

Par contre je n'ai pas bien compris le rôle du tampon 10x. S'agit-il bien d'un tampon permettant l'activation de l'enzyme en question Dans ce cas, une quantité insuffisante de ce tampon expliquerait - il une digestion incomplète de l'enzyme, d'où le fait que j'obtienne des fragments trop gros restant coincés en haut du gel comme tu l'as dit.  [...] Donc dans ce cas, le fragment d'ADN visible au puit 4 à déjà été digéré. puisqu'en regardant ma carte de restriction, je constate que EcoRI permet d'obtenir un fragment de 21 226 pb. Pourtant mon puit 4 ne contient pas d'enzyme, donc pas de digestion possible.  [...]

enzymes de restriction

A noter que dans des applications de biologie moléculaire du gène impliquant les techniques courantes du génie génétique, la spécificité de coupure (on parle alors de fidélité de l'enzyme) peut être artificiellement altérée par les conditions dans lesquelles la digestion d'ADN s'effectue par chaque enzyme de restriction.  [...] On parle alors d'activité star qui altère la fidélité de l'enzyme. Les conditions expérimentales de rapport enzyme.substrat, volume de digestion, temps de digestion, force ionique et pH des tampons de digestion, présence ± concentrée de glycérol ont toutes un fort impact sur la fidélité de l'enzyme à couper la séquence d'ADN à l'endroit désiré et pas n'importe où ailleurs.  [...]

besoin d'aide lactase

j'aurais une autre question. pourquoi le lactose, si il n'est pas digéré par l'enzyme, rend-il malade Les personnes intolérantes au lactose ont souvent des maux de ventre prononcés quand elles boivent du lait. Le lactose ne pourrait-il pas traverser le système digestif et se faire oublier.  [...] est ce que cela signifie que les intolérant ne posséde pas cette enzyme qui permet la digestion du lactose si oui j'ai alors tout compris et je vous remercie pour tout.  [...]

[Divers] hydrolyse de l'amidon par l'amylase

..moi je penserais que pour notre digestion cette enzyme de la salive est importante puisqu'elle permet de...euh..de faciliter la digestion ou peut être le broyage des aliments...la salive prépare les aliments à la digestion... en tout cas c'est pas assez précis ce que je dis là.  [...] Alors effectivement l'hydrolyse des glucoses débutent dans la bouche(enzyme présente dans la salive) et elle est terminée au niveau du tube digestif(elle est aussi présente dans le suc gastrique)tout au long du parcours en fait. L'amidon c'est en fait (sans entrer dans les détails) une longue chaine ramifiéé de glucose et donc au fur et à mesure de sa progression, les glucoses au bout des chaînes vont être hydrolysés et absorbés et ceci se fait progressivement jusqu'à l'hydrolyse complète de l'amidon. Voilà.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

Ok, cela n'aide pas vraiment, dis comme cela, mais lorsque je devais faire une carte de restriction, le plus dur est de la commencer. Une fois que tu as les deux premiers sites, cela devient généralement plus facile. Je te conseille donc de tracer un cercle, placer le site EcoRI, puis son copain, BamHI.   [...] Bonjour à tous j'ai également un problème au sujet d'un exercice sur les cartes de restriction j'ai mis le fichier en question, il s'agit de la fin de l'exercice 1 de ce TD ou il faut donner la carte de restriction du plasmide pk rec.   [...]

[Biologie Moléculaire] Connaitre séquence génomique....

Snif, a priori ma proposition n'a pas convaincu... Je voudrai juste rajouter que c'est vraiment pas bcp de boulot. Pour le genome walking tout est fourni dans le kit. enzyme de digestion, ligase pour le tag, temoin.  [...] moi je me suis servi de cette technique quand je travaillais sur un organisme dont le génome n'etait pas connu. Ca marche bien, l'interet d'utiliser plusieurs enzyme de digestion c'est que justement tu as des fragmentsde taille variables. Si ton genome est GC riche, alors prends des enzymes qui coupent plutot des sites AT riche (ils seront plus rares.).  [...]

clonage/enzyme en dehors du site multiple de clonage

Mon encadrant m'a donc dit de refaire une digestion contrôle en prenant une enzyme en dehors du site de clonage multiple (MCS) mais je ne vois pas à quoi cela va servrir.  [...] Ou peut-être ta digestion n'a tout simplement pas fonctionné (problème de compatibilité enzymes/buffer, trop petit volume + évaporation, stock d'enzyme foutu si resté à température ambiante, etc).  [...]

[Biologie végétale] Compréhension d'un article sur les OGMs

Dans le cas du plasmide Ti d'agrobactérium, de manière similaire on y ajoute notre gène d'intérêt qui va remplacer l'ADN-T, ce plasmide est réintégré au sein d'agrobactérium et ce dernier infecte ensuite une plante et transfert l'ADN-T, on obtient donc comme ça un OGM.   [...] fidelity of the constructionwas confirmed by enzyme digestion and.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Et je ne m'inquiéterai pas trop d'avoir des concatémères, tu utilises 2 enzymes qui font des sticky ends qui ne sont pas compatibles alors il est très peu probable que tu es des 2 inserts ligués en même temps dans ton pET45b. Si tu veux en être certain la meilleure technique est de faire une control digestion avec une enzyme qui est au milieu de ton insert et une enzyme qui est dans ton vecteur (pas au milieu sinon ça ne sert à rien).  [...] Pour les conditions de digestion, j'ai travaillé avec des enzymes Fermentas je suis aller sur leur site, ils proposent de faire une double digestion dans du tampon BamHI avec 2fois plus d'enzyme NotI que BamHI. J'ai digéré 5µg pendant un peu plus de 2h00.  [...]