• Santé - Technique, Protéine, Séquence

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

l'immunoblotting est juste une des techniques utilisées pour arriver à ces conclusions (par visualisation de l'intensité sur SDS PAGE ), donc à priori je ne vois pas le lien avec une protéine endogène.  [...] d' ou ma question. connais tu une technique pour vérifier que la cysteine est bien proche du site actif, sachant qu on connait La séquence de la protéine mais pas sa structure 3D.  [...]

[Biotechnologie] Retrouver la séquence ARNm d'une protéine

J'ai aujourd'hui du chercher la séquence ARNm (épissée) d'une protéine. Après un peu de recherche, j'ai fini par trouvé, en passant par NCBI, puis en retrouvant la CCDS. Est-ce que quelqu'un aurait une autre technique, ou bien un outils plus performant/rapide.  [...] C'etait dans quel cas Si la sequence n'est pas trop grande, tu peux convertir les acides aminés en codon (dégénérés). Il restera certaines incertitudes, mais tu auras une sequence quasi parfaite.  [...]

[Biochimie] dnase 1

Admettons qu'un site du génome soit particulièrement ciblé par cette DNAse I. Je suppose que tu peux confirmer ce résultat en vérifiant que ce site n'est plus clivé la DNAse quand il est fixé par une autre protéine. Cette autre protéine empêche l'action de la DNAse, on dit qu'elle protège la séquence d'ADN dont il est question (je te propose une métaphore super naze pour illustrer.  [...] il y a une chaise, quelqu'un s'assoit dessus, donc tu ne peux plus t'y asseoir. C'est l'idée de la séquence d'ADN qui ne peut pas être liée par la DNAse + autre protéine en même temps). J'imagine que c'est une technique utilisée pour les régions promotrices comme tu le cites puisque celles-ci sont la cible de protéines particulières.  [...]

Maladies à prions : les biologistes accusent de nouveau le cuivre

Les prions causent les encéphalopathies spongiformes, qui sont incurables. maladie de la vache folle, maladie de Creutzfeldt-Jakob ou kuru (maladie identifiée en Nouvelle-Guinée). Mais le mauvais repliement des protéines et la formation d'amas protéiques sont des mécanismes qui se retrouvent dans d'autres troubles neurodégénératifs comme les maladies d'Alzheimer et de Parkinson.  [...] La protéine PrP impliquée dans les encéphalopathies spongiformes est capable de se lier à des métaux. son extrémité N-terminale contient quatre copies d'une séquence qui s'associe à différents ions divalents, comme Cu 2+, Ni 2+ et Mn 2+. Grâce à une technique d'imagerie très puissante, les chercheurs ont montré que le mauvais repliement de PrP commence lorsque des ions cuivre se lient à cette extrémité protéique.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Là est le problème...Je ne comprend pas par quelle téchnique on peut purifier cette protéine dont on connait uniquement la séquence... peut-on purifier la protéine grâce aux résultats obtenues dans les différentes expériences.  [...] Je ne suis pas du tout experte en purification de protéines mais en lisant les différentes étapes de la manip je me dis qu'en insérant la séquence codante pour la ligase dans E. coli, ils ont peut être en même temps créé une protéine de fusion avec une étiquette (par exemple GST ou Tag) et ont pu ensuite purifier cette protéine de fusion sur une colonne d'affinité.  [...]

Les gènes en mouvement observés dans le noyau des cellules

La technique TGV ( Talemediated Genome Visualization ) est basée sur l'utilisation de protéines de liaison TALE à ADN artificiel, capables de cibler une séquence génétique spécifique. Spooky Pooka, Wellcome Images, cc by nc nd 2.0.  [...] Les chercheurs sont en effet parvenus à fusionner une protéine TALE à la mCLOVER, une protéine fluorescente verte (ou GFP, qui valut le prix Nobel de chimie 2008 à ses découvreurs). La technique a permis d'observer la localisation de séquences d'ADN spécifiques au sein même du noyau de cellules vivantes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transformation levure par PCR

Je travail sur les levure et je souhaite les transformer afin qu'elles expriment ma protéine d'intérêt couplée à une protéine fluorescente. Pour cela j'utilise la technique. PCR based transformation method qui consiste à utiliser un plasmide (pRS306) qui contient la protéine fluo et faire une PCR avec des oligonucléotides codants pour les séquences de mon gènes que je veux marquer.  [...] Je comprend la théorie mais techniquement je ne vois pas du tout comment cela se produit, comment mon plasmide intègre mes séquences codantes Est ce que il faut digérer mon plasmide avant si vous avez des publi ou des revues qui explique ca en détail je vous en serais très reconnaissant.  [...]

Levures et TAP tag à grande échelle

Dans mon cours en revanche, c'est écrit que le but du TAP-tag à grande échelle est d'assigner des fonctions aux protéines et de voir leurs interactions... En fait, je comprends parfaitement la technique du TAP tag (purification ou même élimination d'une protéine cible avec billes d'IgG et de calmoduline) mais en revanche, je vois mal comment identifier des protéines et leurs interactions avec cette technique.  [...] La technique est utile pour émettre des hypothèses sur la fonction d'une protéine inconnue. en trouvant dans un même complexe des protéines de fonction connue, on peut avoir une idée de la fonction de la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dominant négatif

Bonjour à tous je voulais savoir comment marche la technique de dominant négatif et comment l'utiliser concrétement pour inhiber une protéine et est ce un K out ou plutot down c'est à dire avec quelle efficacité l'expression de la protéine peut elle être réduite merci beaucoup pour vos réponses.  [...] Les mutants dominants négatifs, les KO ou les RNAi sont employés généralement dans le même but, mais l'utilisation de telle ou telle technique peut dépendre de la protéine étudiée ou de l'organisme chez lequel tu travailles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réalisation d'un Southern Blot

Encore une question. hors mis un northern blot et western, quelle autre technique pourrait être utilisée pour détecter une séquence génique dans de l'ADN.  [...] Sinon la PCR me parrait une bonne technique pour la mise en evidence d'une sequence sur l'adn (probleme, il faut connaitre la sequence. mais bon il faut aussi connaitre la sequence pour le southern).  [...]