• Santé - Technique, Protéine, Intérêt

Levures et TAP tag à grande échelle

La technique du TAP-tag permet bien de purifier des complexes entiers. On utilise une protéine fusionnée au tag comme appat, et au bout de deux purifications (colonne d'IgG et colonne de calmoduline), on considère que les protéines co-purifiées interagissent de manière assez spécifique avec la protéine d'intérêt pour qu'elles forment réellement un complexe.  [...] La technique est utile pour émettre des hypothèses sur la fonction d'une protéine inconnue. en trouvant dans un même complexe des protéines de fonction connue, on peut avoir une idée de la fonction de la protéine d'intérêt.  [...]

Technique du saut d'exon

La technique du saut d'exon fait intervenir des oligonucléotides antisens qui vont s'hybrider à l'ARNm complémentaire pour que le ribosome saute l'exon muté durant la traduction ou bien cette technique ne cible que le phénomène d'épissage (ce que je vois partout).  [...] Oui donc s'il est changé quel intérêt de cette technique thérapeutique Car tout le reste va donner une protéine différente donc non fonctionnelle.  [...]

Les nanocristaux appliqués à l'étude du vivant

La technique classique consiste à fusionner la GFP avec une protéine d'intérêt et surexprimer cette protéine fusion dans les cellules. En illuminant les cellules avec une source de lumière de longueur d'onde définie, la protéine devient fluorescente et peut être suivie dans la cellule en temps réel.  [...] Cette méthode n'est pas sans problèmes techniques et impose la surexpression d'une protéine hybride qui peut affecter la fonction de la protéine à étudier et être toxique pour les cellules.  [...]

La méthodologie BRET | Dossier

Au cours de l'année 1999, une nouvelle technique, représentant une avancée considérable pour l'étude des interactions protéine-protéine, a été mise au point. la technique de BRET ( Bioluminescence Resonance Energy Transfer).  [...] Cette technique est dérivée d'un processus biologique naturel, existant dans un organisme marin, chez lequel l' énergie émise par une luciférase excitée est transmise à une GFP (Green Fluorescence Protein) qui émet alors de la lumière à une autre longueur d'onde.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transformation levure par PCR

Je travail sur les levure et je souhaite les transformer afin qu'elles expriment ma protéine d'intérêt couplée à une protéine fluorescente. Pour cela j'utilise la technique. PCR based transformation method qui consiste à utiliser un plasmide (pRS306) qui contient la protéine fluo et faire une PCR avec des oligonucléotides codants pour les séquences de mon gènes que je veux marquer.  [...] Je comprend la théorie mais techniquement je ne vois pas du tout comment cela se produit, comment mon plasmide intègre mes séquences codantes Est ce que il faut digérer mon plasmide avant si vous avez des publi ou des revues qui explique ca en détail je vous en serais très reconnaissant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

cette technique permet de fusionner la GST avec une protéine d'intérêt pour par exemple étudier les partenaires protéiques,  [...] Ah donc si je comprend bien, cette technique permet de récuperer des protéines En gros on se sert de l'étiquette GST de la même manière qu'on se sert des billes pour l'immunoprécipitation.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Certes, mais le gros intérêt de la technique est qu'une fois la protéine d'intérêt précipitée, on peut révéler des protéines qui interagissent potentiellement avec elle puisqu'elles auront été entraînées également. Et ça on ne peut le faire en wb.  [...] Je pensais qu'on appelait cette technique la co-immunoprécipitation mais moi je parle de l'immunoprécipitation seule, donc on isole une protéine non liée à un complexe a priori.  [...]

[Biologie Moléculaire] Techniques de transfert

La technique utilise l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide pour séparer les protéines, préalablement dénaturées, selon leur masse. Les protéines sont ensuite transférées depuis le gel sur une membrane (typiquement en nitrocellulose), où elles sont exposées à un anticorps spécifique de la protéine d'intérêt.  [...] Il est possible grâce à cette technique de détecter la présence d'une protéine dans un tissu, d'évaluer sa taille, sa concentration, les variations de cette concentration, effectuer des comparaisons de concentrations entre différents groupes, etc.  [...]

[Biochimie] Quelques questions sur les OGM

-Si tu veux faire exprimer une protéine exogène, par exemple une enzyme qui permet a une bestiole de résister a une toxine, tu insères le gène codant pour ton enzyme dans le génome de la bestiole, permettant ainsi à la protéine d'étre produite par l'individu.  [...] -Si tu veux empêcher l'expression d'un gène, par exemple pour recréer chez l'animal une maladie génétique humaine, tu peux utiliser la technique du knock out. Il s'agit de supprimer le gène d'intérêt pour que la protéine(s) qu'il encode ne soit plus produite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Diminution de pb lors de la PCR

Bonjour. Lors d'une technique de PCR, j'aimerais savoir comment est-il possible d'obtenir un produit PCR vraiment plus petit (environ la moitie), en terme de paire de base, que ma proteine d'interet initial J'ai eu beau chercher mais la seul explication que j'ai trouvé est que le temps d'élongation du brin par la polymérase n'est pas suffisament long et que celui-ci n'a pas eu le temps de bien répliquer l'ADN.  [...] Du coup, au final, vous observez mieux le petit fragment et que votre fragment d'intérêt. L'effet sera d'autant plus marqué que le petit fragment sera petit devant le grand fragment.  [...]