• Santé - Technique, Fusion, Protéine

Les nanocristaux appliqués à l'étude du vivant

La technique classique consiste à fusionner la GFP avec une protéine d'intérêt et surexprimer cette protéine fusion dans les cellules. En illuminant les cellules avec une source de lumière de longueur d'onde définie, la protéine devient fluorescente et peut être suivie dans la cellule en temps réel.  [...] Cette méthode n'est pas sans problèmes techniques et impose la surexpression d'une protéine hybride qui peut affecter la fonction de la protéine à étudier et être toxique pour les cellules.  [...]

Régulation et localisation : les techniques

- la régulation transcriptionnelle d'un promoteur (technique autre que la fusion transcriptionnelle avec un chromogène).  [...] - la localisation cellulaire d'une protéine (technique autre que la fusion traductionnelle avec une protéine fluorescente).  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue La protéine de fusion pourrait-elle mimer les fonctions de la protéine soluble initiale.  [...] Mettre une séquence IRES entre les deux ADNc revient à faire un ARNm bicistronique en effet, donc un ARNm de fusion si on veut, mais deux protéines bien distinctes après traduction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

J'ai quelque souci de production de la protéine, j'arrive en avoir mais à des quantités pas très élevée. Sauriez-vous combien il faut de proteine en fusion avec la GST sur les billes pour faire le test pull down.  [...] Personnellement j'utilisais environ 10-15µg de proteine de fusion GST (80kDa au total) couplées aux billes GST pour faire mes test d'intéractions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

cette technique permet de fusionner la GST avec une protéine d'intérêt pour par exemple étudier les partenaires protéiques,  [...] Ah donc si je comprend bien, cette technique permet de récuperer des protéines En gros on se sert de l'étiquette GST de la même manière qu'on se sert des billes pour l'immunoprécipitation.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus.  [...] Pour une protéine de fusion, les deux séquences codantes sont mises à la suite l'une de l'autre sans codon stop entre les deux. une seule chaîne est produite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

J'utilise une protéine transgénique qui est en fusion avec le marqueur GFP. Grâce à la fluorescence il m'est possible de suivre l'expression de ma protéine dans le sang des animaux. Mais voilà que la fluorescence a subitement disparue de tous les animaux, alors que la protéine transgénique continue de s'exprimer.  [...] Ma fusion est Ts et sensible aux chocs osmotique (la proteine est ok, mais la GFP est retiree). Pourquoi, je n'en sait rien, mais ce qui est sur c'est que c'etait une degradation.  [...]

Phage display et banque d'ADNc

Mais du coup, si une banque, c'est plein d'ADNc différents, on fait des protéines de fusion avec tous les ADNc différents et du coup le phage va exprimer en protéine tous ces ADNc Et après on fait la sélection.  [...] Donc on a des milliers de phages avec chacun une protéine de surface différente (correspondant à la fusion de l'ADNc porté avec la protéine de surface).  [...]

Les récepteurs couplés aux protéines G | Dossier

Pour ces deux dernières techniques, les protéines éluées de la matrice d'affinité sont séparées par électrophorèse mono- ou bi-dimensionnelle et analysées par spectrométrie de masse.  [...] Approche à partir du récepteur entier (TAP). La technique de purification par TAP repose sur la fusion du récepteur entier avec une étiquette portant deux modules d'affinité séparés par un site de clivage par une protéase spécifique. Cette méthode permet d'effectuer une purification de complexes protéiques en condition native.  [...]

Technique

dans le GST, il faut un tag GST, donc une protéine de fusion. Dans l'IP, pas besoin de protéine de fusion, on peut le faire sur une protéine native, mais il faut un anticorps spécifique.  [...] De la, on peut dire que le GST est universel mais nécessite de faire une protéine de fusion, alors que l'IP on peut la faire en conditions physiologiques, mais il faut un anticorps spécifique qui fonctionne. etc.  [...]