• Santé - Technique, Fonction, Protéine

Levures et TAP tag à grande échelle

Dans mon cours en revanche, c'est écrit que le but du TAP-tag à grande échelle est d'assigner des fonctions aux protéines et de voir leurs interactions... En fait, je comprends parfaitement la technique du TAP tag (purification ou même élimination d'une protéine cible avec billes d'IgG et de calmoduline) mais en revanche, je vois mal comment identifier des protéines et leurs interactions avec cette technique.  [...] La technique est utile pour émettre des hypothèses sur la fonction d'une protéine inconnue. en trouvant dans un même complexe des protéines de fonction connue, on peut avoir une idée de la fonction de la protéine d'intérêt.  [...]

[Biochimie] Gamme étalon BSA

je te conseille de diluer ton échantillon protéique (dans le tp avec lequel tu fais ton 0/blanc) pour que ta Do de l'échantillon rentre dans ta gamme BSA. Après tu trouves la valeur/concentration de ton [B][B] échantillon dilué et tu fais ton calcul pour la concentration finale de ton échantillon en tenant compte de la dilution que tu as effectué.  [...] c'est simple. quand tu fais un dosage indirect, tu fais une lecture d'A sur un produit qui est formé en présence de protéines (complexes), il peut donc y avoir une saturation du système en fonction de la technique. La quantité de protéine n'est peut être plus proportionnelle a l'absorbance.  [...]

Le gène de l'odeur de la terre

Un an après avoir fini le séquençage de son génome avec l'aide du Wellcome Trust Sanger Centre de Cambridge, et pour faciliter son étude, les scientifiques du JIC ont développé un mécanisme d'inactivation des gènes chez cette bactérie en utilisant la bibliothèque de cosmides utilisée pour le séquençage.   [...] L'identification du gène, sco6073 (cyc2), responsable de l'odeur de la terre n'est qu'une application de cette technique et la démonstration de son efficacité pour identifier la fonction et le fonctionnement des quelques 8 000 genes de la bactérie Cyc2 code pour une proteine dotée de deux domaines de synthèse des sesquiterpenes.  [...]

[Immunologie] immunoblot...

Je crois que l'objet de la question de Clac2000 est comment, à partir du standard, on détermine pus précisément le PM de la protéine. Si tu la connais, effectivement c'est juste une vérif et une lecture approximative sur le gel suffit. Si tu ne la connais pas, tu peux faire une courbe ou tu mets le Rf (distance parcourue/distance totale) en fonction du poids moléculaire connu de tes standards.  [...] Il me semble effectivement que pour avoir un droite il faut une échelle log, et la tu calcules le Rf de ta protéine et tu lis sur ton graphe quel PM ça lui fait, ou avec l'équation de ta droite si tu en obtiens une. Il est certain que la technique n'est de toute façon pas très précise, tu peux trouver un PM différent en fonction du standard que tu vas utiliser, du type de gel etc.  [...]

[Biochimie] Chromatographies

On me demande de décrire les principes de la chromatographie d'adsorption sur colonne et non les protocoles,seulement je n'arrive pas a distinguer les deux,et surtout je n'arrive pas non plus a comprendre en quoi consiste réellement cette technique,ce n'est pas faute d'avoir lu bcp de documents sur internet,donc si quelqu'un peut m'expliquer avec ses propres mots svp.  [...] je suis d'acord avec youyette,j'aimerai juste insister sur le principe de la chromatographie sur couche mince. c'est une téchnique de séparation des molécules ( à savoir des protéines,des lipides...etc) en fonction de leur hydrophobicité,bien sur en présence de standars,et vous aurez par la suite à calculer les rapports frontaux de ces molécules et déduire à quoi correspond notre protéine ou lipide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dominant négatif

en génétique un dominant négatif est un mutant perte de fonction qui inhibe l'activité de la protéine sauvage. Ainsi meme en présence de la copie fonctionnelle on observe le phénotype mutant.  [...] Alors en fait si j'ai bien compris c'est au niveau génétique que ça se passe, on va modifier le gène de cette protéine de sorte que toutes les protéines produites seront non fonctionnelles donc on peut apparenter ça a un KO mais comment fait on cette manipulation concrétement j'ai une lignée cellulaire qui surexprime une protéine et je veux l'inhiber pour en étudier les effets quelle est la marche à suivre au point de vue technique.  [...]

[Biologie Moléculaire] [biologie moleculaire] Le code génétique

Quant au bug dans cette methode a mon avis tu ne l'aurais meme pas vu, Au moins pour une raison. la nature chimique differente des aa modifierait les proprietes de la proteine ce qui affecterait les methodesde detection de purification (bref tu te rendrais meme pas compte que ta proteine est la.).  [...] Ensuite tu oublies un peu vite que l'on ne connait pas la fonction de 10% des proteines presentent dans une cellules... Lorsque le premier genome eucaryote a ete entierement sequences, les chercheurs se sont appercu que par les technique de biologie moleculaire et de genetique et de biochimie, ils n'avaient identifies que 30% des genes (ce qui signifie qu'aucune fonction n'a pu etre attribuee à 70% des genes en laboratoire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Combien d'enzymes différentes dans le vivant ?

C'est un sentiment, je n'ai pas de données solides pour l'appuyer. Je constate que le nombre de nouveaux repliements et le nombre de nouvelles fonctions croit à présent beaucoup moins vite que le nombre de protéines étudiées et je pense donc qu'on se rapproche de l'asymptote.  [...] Sur le site de la Protein Data Bank, il existe plusieurs tableaux statistiques, par exemple, le nombre de structures de protéines déterminées en fonction de la technique utilisée.  [...]

La méthodologie BRET | Dossier

Au cours de l'année 1999, une nouvelle technique, représentant une avancée considérable pour l'étude des interactions protéine-protéine, a été mise au point. la technique de BRET ( Bioluminescence Resonance Energy Transfer).  [...] Cette technique est dérivée d'un processus biologique naturel, existant dans un organisme marin, chez lequel l' énergie émise par une luciférase excitée est transmise à une GFP (Green Fluorescence Protein) qui émet alors de la lumière à une autre longueur d'onde.  [...]

[Biochimie] Electrophorese bidimensionnelle: oublie d'equilibration

Est ce que c'est grave quand on oublie d'equilibrer les gels (strips). Les elements utilses pour faire le gradien de pH sont les immobulines.   [...] j'ai jamais utilisé la technique, mais d'après mes souvenirs de cours, l'équilibration sert notamment à donner une charge globale négative à toutes les protéines en incubant ton gel dans une solution contenant du SDS. Ca va permettre de séparer les protéines uniquement en fonction de leur taille.  [...]