• Santé - Tampon, Phosphate, Température ambiante

[Biochimie] Tampon phospate

Pourquoi faut-il conserver un tampon phosphate à ph 7 et à température ambiante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En gros pour faire c que tu veux faire, il faut un tampon classique d'extraction (Tris, Nacl, Triton, quelques inhibiteurs de phosphatase et de protéases). La difficulté est due a la taille de la FAS (230kDa je crois) donc il faudra faire un gel peu concentré (genre 8%) pour celle la et un plus concentré pour IR (10 ou 12%).  [...] En fait, tes solutions stock pour le tampon de lyse, a quelle temperature sont-elles stockées A temperature ambiante ou a 4°.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je dois réaliser une extraction d'ADNg à partir de cellules de lignée lymphocytaire. Je possède déjà les culots cellulaires congelés, et j'ai déjà un protocole d'extraction phénol/choloroforme. Mon seul souci, c'est que je n'ai pas de tampon de lyse maison pour mes cellules, ni de protocole de lyse.  [...] Je sais qu'on peut utiliser un tampon de lyse avec du SDS et de la protéinase K, mais je n'ai aucune idée des proportions, ni du temps d'incubation, ni de la température à utiliser… Quelqu'un pourrait-il m'éclairer.  [...]

Immunohistochimie

- Sortir la lame à température ambiante et la laisser refroidir dans du tampon Tris-EDTA buffer, pH 9.0 pendant 15 min.  [...] Les solutions, maîtriser la fixation (temps notamment...), utiliser des protéases, pour info, la prière n'est pas efficace. Les bruits de fonds viennent ensuite, (avec les anticorps commerciaux on peux espérer l'absence de marquage on spécifique) on peut alors agir sur la concentration en anticorps, le temps d'incubation et les rinçages.   [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Je fais ma ligation, 1h à température ambiante avec le tampon 2X de promega.  [...] Pour le clonage 2. SmaI oui je l'utilise à température ambiante (soit 25°C à peu près) et seulement après je rajoute l'autre enzyme à 37°C.  [...]

[Biologie Moléculaire] Préparation des PCR à l'avance?

Que pensez vous des taq master mix commercialisées qui se conservent à temperature ambiante et contiennent la taq, le buffer, les dntp et parfois même le tampon de dépot.  [...] Il y a longtemps j'avais préparé un mix PCR (dNTP, oligos, taq) en trop. Sachant que je devrais le réutiliser je l'avais congelé et réutilisé le lendemain. Aucun problème. On m'a dit ensuite qu'il ne fallait jamais faire ça et du coup je ne l'ai jamais retenté.   [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Les cellules sont prélevées sur héparinate de lithium à partir de sang de volontaires sains. Le sang est dilué au demi dans un tampon Na 2 HPO 4 (PBS) à 0,1 M et à pH 7,4. Au fond de chaque tube, 10 ml d'Histopaque-1077 (Sigma) sont déposés. Après une centrifugation à 400g pendant 30 minutes à température ambiante, les monocytes et les lymphocytes, se trouvant à l'interface plasma-Histopaque, sont récupérés dans un tube à part et mis à centrifuger à 400g pendant 10 minutes, ensuite ils sont mis dans un tampon Hanks' HEPES et conservés à 4°C avant leur utilisation.  [...] La membrane est ensuite lavée 2 fois 10 minutes avant de mettre l'anticorps secondaire de singe (TEBU) dirigé contre les chaînes lourdes et légères des anticorps primaires et marqué à la peroxydase. Cet anticorps est dilué 1000 fois dans le même tampon que l'anticorps primaire, cette étape se fait pendant 45 minutes à température ambiante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Stabilité substrat d'ADN pour test helicase

J'ai repurifié mes sondes sur gel, c'etait vraiment beau (pas d'ADNsb) J'ai elué à 4C dans du tampon contenant en plus du tris et de l'EDTA, du NACL et du MgCl2 pour essayer de stabiliser mon ADN mais toujours rien.  [...] Essaye d'éluer ton substrat en Tris pH8 (10mM), EDTA 0.2mM NaCl 50mM, sans Mg, à température ambiante par diffusion passive (pas par électroélution). Pour ça, tu coupes ta bande d'acrylamide en tout petits bouts (1mm3 environ), tu l'incubes une nuit sur la paillasse sans agitation dans deux volumes du tampon ci dessus et tu contrôles le lendemain qu'au moins 50% de ta radioactivité est passée dans le tampon.  [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

Oui QUIAGEN. Pour ce qui est du lavage, je soumettrai cette idée à l'étudiant car c'est fort probable. Notre éthanol est conservé à température ambiante.  [...] Sinon de mon point de vue, une bonne lyse bacterienne (tampon P2 a temperature ambiante et pas trop vieux -la soude se perime-).  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

J'ai lu quelques informations là dessus qui préconisaient de coater les plaques puis le lendemain de faire le premier lavage et de déposer le tampon de saturation (blocking buffer) puis de laisser évaporer à température ambiante. Une fois les plaques sèches elle seraient conservables une semaine.  [...] Pour la méthode de séchage au séche cheveux, je te la déconseille. Pourquoi Parce que les protéines se dénaturent au alentour de 44°C. Avec ton séche cheveux tu n'as aucun moyen de contrôler ta température. Donc y a des risques que tu abimes sans t'en rendre compte tes anticorps.  [...]