• Santé - Tampon, Charge, Western

[Biochimie] Recette du bleu de bromophénol (BBP)

quelqu'un connait il la recette de base du tampon de charge BBP. Il me semble que c'est Sambrook (et al) d'où nous vient cette recette mais j'ai beau chercher dans la littérature je ne suis pas sûre d'avoir la bonne.. ça change à chaque fois.  [...] Tu veux la composition du tampon de charge de western blot Dans ce cas, pour du 5X. 60 mM Tris-HCl pH 7,4, 40% Glycérol, 10% SDS + une micropincée de BBP (j'ai pas plus précis, c'est a bisto de naz ).  [...]

[Génétique] Western blot

Je suis actuellement étudiante en Master 1 de génétique et je fais mon stage dans un labo de génétique et je fais beaucoup de Western Blot sur des lysats issus de lignées de liposarcomes. A chaque révélation des bandes, je constate que les bandes du contrôle que je met (la tubuline) ne sont pas identiques d'un puit à l'autre ce qui suggère que je n'ai pas déposé la même quantité de protéine dans chaque puit, mais pourtant je fais bien attention de bien déposer la même quantité de 20µl par puit (30µg de prot pour un QSP de 40µl avec du tampon de laemmli et du tampon de charge.  [...] en fait il est très souvent difficile de réaliser exactement le même dépôt, d'où ces variations. De plus, suivant la méthode utilisée pour doser la concentration en protéine on est +/- précis. C'est pourquoi normalement pour toute quantification on utilise un rapporteur interne qui normalement ne varie pas dans les conditions testées (souvent l'actine ou la tubuline) et on rapporte le signal obtenu pour notre échantillon au signal obtenu pour le rapporteur (une division quoi ^^).   [...]

[Biologie Moléculaire] western,northern,southern

pouvez-vous me donner un tableau qui rassemble les différences entre les 3 techniques. northern-southern et western blot.  [...] pouvez-vous me dire seulement le tampon de charge qu'on utilise avec le sowthern et le northern, pour le western c'est SDS.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon SDS-PAGE

J'ai une autre question à propes des tampon pour les WB. Si je prépare mon tampon avec du méthanol, au lieu du SDS. Le méthanol à t'il même utilité que le SDS Permet-il aux protéines d'avoir une charge proportionnelle à leur masse.  [...] Juste une petite question, est il possible que sur un western blot, si le tampon de charge est un peu vieux (donc que je n'est pas rajouté de B-mercapto avant de l'utiliser mais qu'il sent encore bien fort) il y ai des pont S-S qui aient résisté.  [...]

[Biochimie] Interaction cellule-protéine après précipitation (Western Blot)

Finalement, je suspend mon pellet de protéine dans le tampon de charge et fait un Western Blot.  [...] Me disant que finalement mon problème serait un western moche avec un trop plein de matériel je fais comme si de rien n'était et continue.  [...]

western-blot

je suis entrain de faire des western sur des mutants afin de voir la différence d expression d une protéine dans ces lignees. Or je suis obligé pour cela de précipiter mes protéines sinon je n ai pas les quantites suffisantes.  [...] Je fais également des western blot et j'ai le même problème que toi. je resuspend mes protéines directement dans le tampon de charge donc je ne peux pas quantifier la quantité de protéines que je dépose sur gel.  [...]

[Génétique] Adn

voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une menbrane pour un test de type western. sachant ke la formulation de ce tampn est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( ja i reponde a la kestion) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...] voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une membrane pour un test de type western. sachant que la formulation de ce tampon est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( j'ai deja repondu a cette question) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot /tampon de transfert

Si tu est vraiment très stricte quand au pH que tu a veu ça ne prend pas trop de temps de voir ton pH mais c'est pas d'une grande utilité c'est juste un tampon de transfert.  [...] Pour répondre au dernier message, pour ma part lors des transferts de ma protéine de 26kDa que je faisais sur membrane PVDF avec le même tampon ou très très proche. Je ne dépassais pas les 25 V mais pendant 50 minute-1h. Maintenant, je t'avoue je n'ai jamais essayé autant de volt et temps pour un transfert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

Je voudrais savoir ce qu'il arriverait si on interverti le tampon de migration avec le tampon de transfert Donc ma question est. les tampons jouent-ils un role primordial dans le Western.  [...] NB. j'ecris avec un clavier qwerty aussi veuillez m'excuser pour l'absence d' accent.   [...]

les gels de compression et de sépartion

Pourquoi utilise-t-on un tampon tris avec des pH différents pour les gels de compression et de séparation en western blot.  [...] Les gels sont utilisés pour l'électrophorèse, le wester blot intervient après lors du transfert du produit du gel sur une membrane et révélation par anticorps ou réactions enzymatique. Ne confondez pas les deux.  [...]