• Santé - Sulfate d'ammonium, Protéines, ADN

[Génétique] Extraction ADN des queues de souris

J'ai mis au point au laboratoire le génotypage d'un type de souris. Mais pour ce faire, j'ai dû extraire l'ADN des queues de souris et je me suis servie du tampon MGB qui contient du Tris, de l'ammonium sulfate et du MgCl2 + ajout de béta mercapto et de triton.  [...] A vérifier mais je dirais que le sulfate d'ammonium précipite les protéines et les séparent donc de l'ADN. Le Tris maintient un pH adapté et le MgCl 2 protège l'ADN (interaction entre charges - et +) de sa dégradation par les DNAses.  [...]

Identification des acides aminés d'une plante

Cependant personnelement, avec le matériel que tu peux avoir à disposition, je ferais un broyat de la cellule (tissu dans un mortier), met cela en solution dans de l'eau physiologique par exemple, puis tu fais une pré-purification en faisant précipiter les protéines avec du sulfate d'ammonium.  [...] ==. Note. Pour enlever le surplus de sulfate d'ammonium qui fait précipité les protéines, il te faudra probablement faire des cycle solubilisation - centri - récupération du culot plusieurs fois de suite (la forte concentration en sulfate d'ammonium encore présent pourrait continuer a fait précipiter les protéines et gêner la suite de l'expérience.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

Ce serait bien de décrire comment est mesurée l'activité, ainsi que la méthode de dosage de protéine. Et il faudrait mesurer l'activité et la quantité en protéine à chaque étape, avant le sulfate d'ammonium, après.  [...] à éliminer le sulfate d'ammonium de la précipitation. Si la concentration en sel est trop élevée, la protéine ne s'accrochera pas à l'échangeuse d'ions.  [...]

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

.. Après une étape de centrifugation, ma protéine va être précipité entre 35 et 45 % de sulfate d'ammonium (100%) puis on réalise une nouvelle étape de centrifugation et le culot est resolubilisé.  [...] - Mes solutions stocks de sulfate de protamine et de sulfate d'ammonium doivent elles être préparées dans de l'eau ou dans mon tampon d'extraction (important, il contient 20% de glycérol qui doit largement modifié la solubilité des deux sels précédents) J'ai tenté de préparé le sulfate de protamine dans le tampon et j'ai de gros problèmes de solubilité.  [...]

[Biochimie] Précipitation des protéines.

Il y a une étape ou j'aimerais bien précipiter un maximum de protéines présentes dans ma solution seulement je ne sait pas trop quelle méthode employer (je pencherais plutôt pour un solvant organique, mais lequel). les protéines récupérée me serviront à faire une électrophorèse.  [...] Oui ça marche très bien. précipitation dans 4 à 5 volumes d'acétone (minimum 20 min à -20°C), centrifugation pour récupérer les protéines (15000g pendant 10 min) + 2 ou 3 lavages.  [...]

[Biochimie] purification protéine

l'addition du Sulfate d'ammonium à forte concentration diminue la quantité d'eau disponible pour solvater les protéines.Ces dernières vont se précipiter.  [...] Par exemple,on peut redissoudre le culot dans un volume minimal afin de récupérer notre protéine (déjà séparée des autres se trouvant dans le surnagent).  [...]

Biochimie : précipitation protéines au sulfate d'ammonium, pourquoi NaOH pour réversibilité?

De ce que je comprends (même si ça a apparemment l'air plus complexe), NH4+ et SO4(2-), ioniques, vont entrer en compétition avec ma protéine pour l'eau, ma protéine déshydratée précipite donc. Mais alors pourquoi utiliser de la soude pour re-solubiliser.  [...] Hyp. 2. le pH très basique va permettre de déprotoniser les fonctions amines de ma protéines, qui sera donc chargée plus négativement et donc plus soluble dans l'eau.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Après je fais précipiter mes protéines à l'ammonium sulfate et je reprends le culot dans le tampon sans PVPP ni BSA.  [...] Et un dosage des protéines extraites avec un Bradford modifié (RC DC biorad) à 750 pour pouvoir exprimer mes activités par quantité de prot extraites.  [...]

précipitation des protéines

la précipitation des proteines se fait préferentiellement au sulfate d'ammonium, et on obtient après un culot protéique. Est-ce qu'on peut avoir des protéines ou peptides qui echappent à cette précipitation et pourquoi.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine pour ELISA

On ne peut jamais savoir comment vont se comporter nos protéines avant d'avoir tester empiriquement. Et c'est d'autant plus difficile à prévoir si ta protéine se trouve au beau milieu d'un lysat cellulaire.  [...] Et tu pourrais même tester une précipitation différentielle avec du sulfate d'ammonium si tu veux, avant ou après la chromato. Bref, il y a plusieurs moyens de se débarrasser des autres protéines.  [...]