• Santé - Substrat, Enzyme, Puits

dosage immunologique

Dans le premier cas, tu coates tes puits avec un anticorps dirigés contre la substance à détecter, par exemple anti IL2. Ensuite tu incubes ton échantillon (sérum, surnageant de culture,...) et tu révèles avec un deuxième anticorps couplés à une enzyme. Cette enzyme ve dégrader son substrat qui a été choisi pour changer de couleur lorsqu'il est hydrolysé.  [...] lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait à la maison.  [...]

[Identification] taxonomie moléculaire

pour revenir au sujet, voici une technique de microbiologie qui permet une classification des bacteries. c'est ce que l'on appelle la 'gallerie API', on test les bacteries sur different puits avec differents substrats, et selon la couleur du puit on peut determiner si la bacterie est capable d'utiliser ou non un substrat, entre autre si elle possede tel enzyme ou pas.  [...] selon les resultats obtenus il existe une sorte d'annuaire des bacteries qui permet de classer ou de determiner quelle est la bacterie sur laquelle tu travailles. l'explication en detail de chaque manip est longue a expliquer mais le mot cle c'est 'gallerie API'.   [...]

[Microbiologie] Elisa

Le test ELISA classique consiste à déposer des anticorps dans le fond d'un puits, tu ajoutes l'antigène (qui est complémentaire de ton anticorps préalablement fixé), tu laves (pour éliminer les antigènes non fixés), ensuite tu ajoutes un second anticorps couplé à une enzyme et complémentaire à ton antigène, qui en présence d'un substrat va colorer ton milieu, après il suffit de mesurer l'intensité lumineuse émise.  [...] Mais comme le dit françois_asm regarde sur internet tu as plein d'infos à ce sujet, avec des schémas qui sont certainement beaucoup plus parlants.   [...]

Le test Elisa, célèbre méthode pour détecter le VIH | Dossier

Si les anticorps correspondants sont présents dans le sang, ils s'y fixent (2). L'ajout d'un nouvel anticorps, spécifique à une région de celui déjà présent, est alors effectué (3). Il est pourvu d'une enzyme qui change la couleur du milieu quand on dépose son substrat (4).  [...] La phase suivante consiste à apporter un troisième anticorps, là encore équipé d'une enzyme, spécifique au deuxième anticorps (4). L'ajout du substrat de l'enzyme dans le milieu permet de colorer le puits (5). Si p24 est absent, alors toutes les étapes suivantes sont impossibles et le milieu ne change pas de couleur.  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

Les puits sont ensuite rincés. si l'anticorps secondaire n'est pas fixé, il sera éliminé. On ajoute ensuite de l' eau oxygénée, substrat de l'enzyme. Si l'enzyme est présente, l'eau oxygénée sera transformée en deux molécules d'eau et la couleur de la solution sera modifiée. Le dosage se fait par spectrophotométrie.  [...] Pensez vous qu'on puisse réellement faire un dosage colorimétrique avec l'enzyme peroxydase et de l'eau oxygénée en substrat.  [...]

Antibiotiques et auréole

Si tu creuses un petit trou dans un substrat sec et que tu y déposes une goute d'eau, tu es d'accord pour dire qu'à l'instant ou tu déposes la goutte d'eau, il y a plus d'eau dans ton puits (toute la goutte) qu'autour Ensuite, à l'instant t1, l'eau a commencé à diffuser dans le substrat autour du puits, mais il reste toujours une bonne fraction de ta goutte dans le puits, donc beaucoup d'eau dans le puits, un peu moins autour.  [...] Donc tant qu'il reste un petit volume d'eau dans ton puits initial, il y a une concentration plus importante en eau dans le substrat qui constitue la paroi du puits, que dans le substrat qui définit la périphérie de la tache d'eau qui s'étale.  [...]

[Biochimie] calcul activité enzymatique

On réaliser une mesure enzymatique de chaque fraction en introduisant 10 µL d'enzyme avec du pnitrophenyl acetate comme substrat du pnitrophénol se forme.  [...] c'est une enzyme capable de cliver le meme substrat que l'esterase mais qui est éluée à une concentration en sel superieure à celle de l'esterase.  [...]

[Biologie Moléculaire] pfge haemophilus influenzae

bonjour, j'ai un problème avec le protocole de l'électrophorèse en champ pulsé pfge j'ai obtenu le profil suivant et j'aimerais savoir si c'est un bon profil ou j'ai un problème avec mon protocole, j'ai testé 4 souches différentes mais je sais pas si c'est un bon résultat ou je dois modifier mon protocole.   [...] selon la PJ, dans le premier puit il y'a le marqueur lambda. dans les 4 autres puits il y'a 4 souches différentes et donc 4 protocoles différents. la même enzyme mais des volumes différents dans chaque protocole et condition d'incubations d'enzyme qui varie aussi selon la quantité d'enzyme.  [...]

[Biochimie] Quantifier un western blot

Un moyen de palier ce problème de réponse linéaire limitée du substrat et du film est d'utiliser des anticorps primaire (ou secondaire) fluorescent, mais cela nécessite un dispositif d'acquisition particulier (comme cité plus haut).  [...] le film a une gamme de réponse linéaire, le substrat aussi, la quantité d'anticorps joue aussi un rôle. -. Je suis en effet tombé dans le panneau, certains de mes puits étant largement surchargés.  [...]

[Biologie Cellulaire] PCR et électrophorèse

Je réalise pour la première fois une PCR et une électrophorèse qui va avec et on me demande pourquoi le tampon de la Taq est-il coloré en vert et quel est l'avantage J'ai bien compris que le tampon était indispensable au bon fonctionnement de l'enzyme, mais je ne comprend pas bien l'histoire de la couleur Pour permettre une fluorescence et donc une révélation à l'électrophorèse.  [...] Vous mélangez deux choses. il faut traditionnellement un tampon de réaction, qui permet le fonctionnement de l'enzyme, et un tampon de dépôt, qui permet de stabiliser l'ADN et de déposer l'échantillon dans le puits.  [...]