• Santé - Souris, Sites, Intérêt

[Biotechnologie] système conditionnels

J'ai ecris un document qui devrait finir par être publié tot ou tard sur futura-sciences. Si tu as la possibilité d'attendre. le document fais plusieurs pages et il y a à peu près tout pour répondre à tes questions dedans.   [...] Pour faire rapide, tu introduis par recombinaison homologue des sequence de recombinaison de l'ADN (2 sites lox) de part et d'autre de la sequence du gene que tu veux eliminer. Ces sequences lox sont reconnues par une recombinase (Cre) ce qui fait que si tu croises des souris dont le gene d'interet a ete modifie avec des sites lox avec une souris dans laquelle tu as introduit la Cre, si les descendant recuperent les deux genes et (c'est la l'interet du systeme) qu'ils s'expriment dans le meme tissu (choix d'un promoteur specifique en amont de la Cre par exemple), tu auras deletion irreversible de la sequence d'ADN entre tes sites lox et donc un KO conditionnel.  [...]

[Biologie Cellulaire] Sémiologie- rôle d'un transporteur

On mesure ensuite l'expression de ABCA1 dans différents tissus de ces animaux pour les comparer aux mesures faites sur des souris sauvages.  [...] Ainsi en croisant avec des souris qui ont des sites lox de part et d'autre de ton gene d'interet, la recombinase va permettre le knockout de ce gene.  [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

Un exemple très intéressant est celui des souris non plus KO mais knock-in. Le gène est toujours inactivé mais il l'est par l'insertion de la séquence codant pour la GFP ( green fluorescent protein ) dans la séquence codant pour la protéine. Comme on peut l'imaginer ceci a pour effet de suivre le devenir des cellules dans l'organisme.  [...] Par exemple et grossièrement, on utilisera un promoteur de kératine pour inactiver un gène dans la peau. Pour parvenir à ses fins il suffit alors de générer des souris dont les deux allèles du gène d'intérêt portent deux sites loxP dans le même sens et des souris porteuses du transgène Cre.  [...]

les souris balb/c

je souhaiterais avoir des renseignement sur la lignée cellulaire de souris appelée Balb/c 10.1. Est ce que quelqu'un connaitrais des sites internet ou des documents qui pourrais m'aider dans ces recherches.  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

- pour faire cela, on prend des amorces sens et anti-sens (type AB-5'-HindIII et AB-3'-XhoI, donc entourant le gène d'intéret) contenant des sites de restrictions et on fait une PCR.  [...] 3) La découpe aux sites de restriction permet a) de récupérer le gène AB d'intérêt et b) de l'insérer dans les mêmes sites de restriction sur le plasmide commercial.  [...]

[Biologie Moléculaire] Analyse d'une séquence protéique

Je recherche des sites ou logiciels qui permettent de prédire à partir de la séquence de ma protéine d'intérêt, la présence de domaines de liaisons à des protéines régulatrices, des motifs particuliers, des sites de phosphorylation...etc.  [...] Effectues une analyse de BlastP sur le site du NCBI, rubrique outil BLAST.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

Un point plus général, n'hésitez pas à vous servir de la fenêtre d'aide contextuelle (Help). Il suffit de faire passer la souris sur certains éléments de la fenêtre pour avoir des informations et astuces.  [...] J'ai même rédigé une notice perso en français pour mes collègues (librement adaptée de la votre en anglais, en espérant que vous n'y voyiez pas d'inconvénient. Je pourrais aussi vous la transmettre si vous êtes interessé pour l'adapter et en faire profiter les internautes).  [...]

[Génétique] Production de souris transgéniques

Les FRT, c'est pas pour l'injection en elle même. C'est juste que si tu le souhaite, tu peux placer autour de ton gène d'intérêt des sites FRT. Ca permet, si tu fournis une source de flipase, d'induire une recombinaison site-spécifique et donc d'exciser le gène placé entre les séquences FRT.  [...] Une méthode d'injection de cellules ES a été publiée en 2007 dans Nature Biotechnology. L'injection se fait au stade 8 cellules, après avoir fait une ouverture dans la zone pellucide avec un laser. Cela permet d'avoir des souris homogènes en F0, contrairement à l'injection de cellules ES au stade blastocyte qui produit des souris chimères en F0, qu'il faut recroiser entre elles pour obtenir en F1 25% de souris homogènes. Si cela intéresse.  [...]

[Biochimie] Western blot methanol

pouvais vous me dire quelle est l'utilité de mouiller les membranes PVDF dans du methanol, en fait est ce pour les rendre plus ou moins hydrophobe/philes et quelle est el mecanisme chimique.   [...] De plus, la constitution des membranes de transfert (nitrocellulose et PVDF) ont l'avantage de présenter des sites hydrophiles et des sites hydrophobes, optimisant ainsi leur capacité à fixer les protéines par interactions électrostatiques et hydrophobes, d'où l'intérêt supplémentaire de rendre la membrane de PVDF hydrophile.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]