• Santé - Sondes, Couples, Anticorps

[Biochimie] Southern Blot

Tu fais quoi comme marquage en fait Tes sondes possèdent des nucléotides couplés à de la digoxigénine et tu révèles avec un anticorps anti-digoxigénine couplé à la HRP c'est ça.  [...] En fait, je ne comprends pas pourquoi tu veux que ton marqueur de taille soit visible vu que ta sonde va s'hybrider uniquement sur l'ADN que tu étudies non.  [...]

Alzheimer : un diagnostic précoce grâce aux anticorps de lama !

Et si le diagnostic de la maladie d'Alzheimer pouvait se faire avant les signes de démence Une équipe espère y arriver en fabriquant des sondes composées d'anticorps de lama... En effet, cet animal possède des anticorps capables de traverser la barrière hémato-encéphalique.  [...] Ces sondes seront composées d'anticorps spécifiques des protéines Tau, couplés à un produit de contraste. Celui-ci permettra de visualiser les fameuses protéines, grâce à l'imagerie par résonnance magnétique ( IRM ). Nous sommes en train de mettre au point les anticorps correspondant aux amas intercellulaires de protéine Tau et aux plaques amyloïdes, explique Pierre Lafaye, de l' Institut Pasteur.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

Pour la petite histoire je me suis amusé aussi exactement avec les mêmes enzymes récemment. Du BamHI dans le plasmide et mon insert BglII. Ca marche au poil mais ça n'est pas orienté du coup (on parle d'enzymes compatibles entre elles).   [...] Gniii, tu poses de ces questions, toi... A tout hasard. tu utilises des sondes couplées à des anticorps ou des ARNi (Je n'ai jamais fait ce genre de choses, ni en pratique, ni en exo à l'école...).  [...]

[Biologie Cellulaire] problème de marquage cytochimique

je réalise des hybridation in situ avec des sondes ARNm (U-DIG) sur coupe de morceau d'éponges. je révèle le marquage avec des anticorps anti-DIG couplé a une phosphatase alcaline. la coloration se fait avec du NBT/BCIP.  [...] En dehors de cette hypothèse, si c'est un biais expérimental, on a peut être une perméabilisation, une température d'hybridation hétérogènes sur la coupe. Toutes les coupes sont orientées dans le même sens.   [...]

[Biologie Moléculaire] le diagnostic par RT-qPCR multiplexe : problèmes de lecture des fluos!

J'ai d'abord mis au point les simplex de façon indépendante. J'ai ensuite testé le tout en multiplex. Cela fonctionne toujours bien mais il y a quand même un problème. lorsque je mélange les 4 ARNs avec leurs 4 couples amorces/sondes il n'y a pas de soucis.  [...] Par contre, lorsque je mélange les 4 couples amorces/sondes + 1 SEUL ARN et bien la machine sort des CT dans les canaux correspondant aux autres ARNs non présents dans le mélange. Je précise que tout les éventuels problèmes de spécificité avaient été testés au préalable in silico mais aussi en manip.  [...]

[Biotechnologie] sonde ARN hybridation

- les sondes froides ARN anti sens avec un dig pour reconnaissance de anticorps I et II couplé a un fluorochrome.  [...] De +, pour marquer in vivo on utilise quelle sonde il doit bien y en avoir une pour pas tuer notre souris.. surement la sonde froide je sais pas, aidez moi svp.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et digoxygénine

Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto ) =. Perméabilisation (traitement à la protéinase K) =. Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) =. Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) =. Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine =. Révélation (phosphatase alcaline etc.).  [...] On réalise la saturation avant d'ajouter l'anticorps. donc ici avant d'ajouter l'anticorps anti-dig (qui est le seul anticorps que tu ajoutes). dans une immuno avant l'anticorps primaire.  [...]

Particularités membranaires des lysosomes

Les récepteurs du mannose 6 phosphate sont stockés dans un compartiment endosomal tardif qu'on appelle corps multivésiculaire (MVB), car il contient de nombreuses petites vésicules internes. Ce compartiment est un centre de tri pour la cellule. En effet, des molécules (récepteurs membranaires, hydrolases.   [...] Salut, pour juste completer les autres réponses, si tu veux visualiser des lysosomes en fluo fixé ou en live il existe des sondes comme le lysotracker de chez molecular probes (j'ai pas d'action chez eux.) ou aussi la sulforhodamine B pour les sécrétoires, ce qui évite d'utiliser les anticorps.  [...]

[Divers] Microscopie à fluorescence et confocal

Pour comparer avec l'épifluo, si tu as une cellule (ou disons plutot une racine pour que l'exemple soit parlant) a l'épifluo, du fait de l'épaisseur tu pourras pas focaliser et obtenir juste la fluo qui est à l'interieur, en plein milieu, si tu veut juste voir la zone en plein milieu tu vas devoir passer par une découpe au microtome afin d'avoir une fine tranche, tu peux mettre les sondes fluo (ex anticorps-FITC) sur cette tranche et tu verra cette zone là qui t'intéresse,  [...] Au confocal tu peux obtenir cette meme tranche sans avoir a découper puisque tu peux ne récuperer que la lumière qui vient de cette zone, sans avoir a couper et isoler cette zone, tu ne verra pas la fluo qui vient des cellules au dessus et en dessous.   [...]

[Biochimie] Analyse de l'expression du gène fos

Ca va être difficile de répondre à ces questions, vu que nous ne comprenons pas nous même à quoi a servi ce gel. (Peut etre pour vérifier que les sondes étaient correctes).  [...] Le couplage UTP-dig (dig pour digoxine) est un classique pour marquer de manière non radioactive les sondes. La synthèse des sondes se fait par transcription (de plasmides en général) ou par PCR et l'UTP marqué est incorporé dans dans le transcrit/amplicon comme un UTP ou un TTP.  [...]