• Santé - Solution, Gamme, Quantité, Cellules

[Biologie Cellulaire] Test cytotoxicité MTS

Je suis sceptique quant à l'idée que vous obtiendrez une réponse précise. Je pense que la seule solution est de faire une gamme pour tester la quantité de cellules optimale.  [...] Clairement il vous faut faire une gamme de dilution pour voir ce qui vous va le mieux. Pour vous répondre il faudrait connaitre les lignées, mais surtout voir comment vous travaillez. En culture cellulaires certaines personnes ont la main verte et tout pousse du feu de dieu, d'autres on plus de mal et rien ne pousse.  [...]

Housekeeping gene (gene de ménage)

À votre place j'etalonnerai avec une gamme obtenue avec des quantités décroissantes d'ADN extrait d'une quantité de cellules connue (pour avoir une quantification en nombre de cellules).  [...] Mais dans votre cas, vous ne mesurez pas un transcrit, mais une quantité de cellules. Mesurer un transcrit (que ce soit d'un housekeeping gene ou de n'importe quoi d'autre) introduit un biais, car (par expérience) même un gène considéré comme référence n'est pas utilisable quand on compare des tissus différents.  [...]

[Divers] gamme étalon

par exemple si tu veux doser la BSA (qui absorbe la lumiere a une longueur d'onde particulière) dans une solution, tu peut utiliser une solution pure de BSA et la diluer a certaines concentrations et regarder l'absorbance de chacune de ces dilution.  [...] en fonction de l'intensité d'absorbance de chaque dilutions dont tu connais la concentration (6-7 dilutions de différentes concentrations), tu peux tracer ton graphique d'absorbance et ensuite mesurer l'absorbance de ta solution mystère.  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Dans le but d'étudier les interactions entre 2 protéines, je voudrais faire un dot plot pour immobiliser ma première protéine sur la membrane de nitrocellulose, par la suite je voudrais faire un overlay ou j'incube ma membrane de nitrocellulose dans la solution de la deuxième protéine et je révèle les interactions par l'anticorps de la deuxième protéine.  [...] Si tu es riche en matériel, tu peux commencer par faire des tests par toi même, par exemple en faisant une gamme de quantité a déposer, puis une gamme de concentration de ta solution de protéine, sans oublier les contrôles adéquats.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

une solution serait de faire une extraction témoin sans échantillon que tu utiliserais pour faire la gamme, mais je n'ai aucune idée de si la quantité qui sera présente aura un impact sur le dosage.  [...] Et un dosage des protéines extraites avec un Bradford modifié (RC DC biorad) à 750 pour pouvoir exprimer mes activités par quantité de prot extraites.  [...]

[Biologie Moléculaire] question sur la QPCR

Logiquement tu dois avoir une gamme d'étalonnage, c'est à dire des puits où ont été mis des quantités connue d'ADN d'intérêt. Grâce à ces puits, on peut tracer une droite reliant les Ct et les quantités d'ADN. Avec la taille du génome et le nombre d'Avogadro, tu peux calculer combien de cellules il a fallu lyser pour obtenir cette quantité d'ADN (ce qu'on appelle équivalent génome).  [...] J'ai bien une gamme d'étalonnage avec des concentrations connues. Nous avons réalisés des dilutions au 10ème d'une solution mère à 10ng/mL (4 dilutions successives). J'ai donc calculer à partir de la concentration mère les concentrations filles en divisant par 10 à chaque dilution.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Les cellules sont remises en suspension dans les 10 ml de plasma, et diluées au 1/10 grâce à une solution isotonique de chlorure d'ammonium (cf. annexe 1), l'hémolyse dure 12 minutes. Les tubes sont ensuite centrifugés à 400 g pendant 10 minutes à 4°C, le surnageant est éliminé et les culots lavés par une solution de Hanks'HEPES (cf.  [...] Pour être utilisée dans l'étude de liaison ou dans la mesure d'activité, il est nécessaire de quantifier la protéine kinase C, ceci est fait par un dosage de Lowry. Pour cela, une gamme étalon est réalisée en utilisant une solution de sérum albumine comme source de protéines, chaque tube de cette gamme et chaque tube échantillon à doser faisant 0,5 ml.  [...]

[Biotechnologie] méthode de Bradford

J'ai une toute petite question sur le principe de cette méthode. Lorsqu'on veut par exemple quantifier les protéines d'une solution à l'aide d'une gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie. Où met on le Bradford est ce qu'il est sur toute la plaque de micotitration ou bien il doit être mélanger dans chaque puits avec le sérum albumine et notre solution à titrer.  [...] Et si j'ai bien compris la gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie va réagir avec le Bradford qui aura une coloration de plus en plus intense plus la concentration sera élevée, en comparant avec notre solution à doser qui elle aussi à réagit avec le bradford et va donner une certaine coloration, on saura donner la concentration en proteine de la solution à doser en fonction de son intensité en bleu Ai-je bien compris.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Dans le cas d'une quantification dite relative où n'est pas utilisée une gamme de cDNA, le calcule des quantités de cDNA peut alors être 2^-Ct si E=2 (une dilution de raison 2 des échantillons est alors réalisée, mais sans connaissance de la concentration de cDNA cible dans ce même échantillon).  [...] J'ai confondu avec la différence de quantité relative d'un point de la gamme à l'autre qui elle, en toute logique, doit correspondre au facteur de dilution si ton efficacité est bien de deux.  [...]

[Biologie Cellulaire] Toxicité d'un inhibiteur de caspase 3

Les données du constructeurs ne parlent pas de toxicité du produit ni d'une posologie en particulier. Ils préconisent seulement une concentration (de 1000X à 5000x).   [...] Tu devrais peut-être essayer de l'utiliser à concentration finale 1000x inférieure à celle de cette solution-mère, voir même tenter une gamme de 1000 en 1000 depuis 1000x à 5000x pour voir laquelle convient le mieux à ton type cellulaire.  [...]