• Santé - Site, Restriction, Enzymes

[Biologie Moléculaire] clonage en phase

Les enzymes de restriction sont des endonucleases, si vous n'ajoutez pas quelques nucléarises devant votre site de restriction, ça ne coupera pas. Quand je faisais ce type de manip', j'en ajoutais six.  [...] Je rejoins Piwi sur le fait que les enzymes de restriction sont des endonucléases. Allez faire un tour sur cette page pour voir quel est le nombre de nucléotides à ajouter avant vos sites de restriction pour que la réaction soit optimale.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

Je suis d'humeur vicieuse aujourd'hui Et comment tu ferais si tu disposais de plusieurs enzymes de restriction, mais tu n'as pas de site de restriction pour la même au sein de l'insert.  [...] Le créer par PCR est une très bonne idée, mais il y a plus simple. C'est pour cette raison que j'ai parlé de plusieurs enzymes de restriction. En effet, si l'on regarde bien, il y a des enzymes qui clivent des séquences semblables, du genre BglII et BamHI. 5'A^GATCT3' et 5'G^GATCC3', respectivement.  [...]

[Génétique] marche sur chromosome

En pratique, tu sais quelle est la couleur du marqueur des bords. On cherche donc à faire apparaître un site, par hybridation (et reconnaissance par fluorescence par exemple). Si ce site n'a pas été coupé par une enzyme de restriction, il doit apparaître 10 fois (puisque tu as 10 banques).  [...] Puis tu cherches à allumer un second site. Ce site s'allume sur de nouveaux segments mais aussi sur des segments déjà allumés par le précédent marqueur. Ce sont des segments qui se chevauchent (car ils n'ont pas été coupés aux mêmes endroits à cause des différentes enzymes de restriction).  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Je me permets de vous écrire car j'ai un TP de cancérologie ou nous devons réaliser une carte de restriction d'un plasmide inconnu et on doit se débrouiller. On a a notre disposition les enzymes. et II, BamH1, BglII, Eco RI, Eco RV, Hind III, Pst I, Pvu II, Sac I, Sma I, Stu I, Sba I et Xho I.  [...] Ceci devrait te permettre de réduire le choix de tes enzymes et le nombre de puits. Après, faut éviter de choisir des enzymes dont le site de restriction est trop semblable. J'entends par là qu'il y a des enzymes qui reconnaissent le même site palindromique, mais ne le coupe pas de la même façon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Explication. après avoir amplifié mon insert par PCR, je le digère d'un côté avec une enzyme qui donne des extrémités cohésives (BglII pour ne pas la citer). Seulement, le site de reconnaissance est lui-même à l'extrémité de mon insert (car je l'ai ajouté artificiellement grâce à mes primers), si bien que le site n'est flanqué que de 2 paires de bases seulement d'un côté, et de tout le reste de mon insert de l'autre.  [...] J'ai effectivement coupé l'autre extrémité de mon insert avec une autre enzyme pour m'affranchir de toutes les étapes de phosphorylation / déphosphorylation. Et encore, ma ligase a des propriétés de polymérase et est capable de réparer l'ADN avant la ligation, si bien qu'elle peut quand même lier deux extremités cohésives différentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage petit fragment d'ADN

Moi je rajoute avant le site des nucléotides, car certaines enzymes de restriction ont besoin d'un environnement nucléotidique pour fonctionner.  [...] A la fin du catalogue NEB ou sur leur site, il donne le nombre de nucléotides qu'il faut avoir entre le bord et le site de restriction pour que la digestion se fasse de manière correcte.  [...]

Enzymes de restriction

Bonsoir, lorsque l'on veut étudier les ARN ribosomaux, ou d'autres séquences, pourquoi utilise t-on plusieurs enzymes de restrictions Je sais que chaque enzyme a un site de restriction spécifique mais je n'arrive pas à comprendre l'utilité de cette technique.  [...] J'ai effectué des recherches sur internet mais je ne vois ce que l'on veut nous faire dire... En espérant que ce soit plus clair pour vous, car pour moi, c'est toujours le flou complet.   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage sh dans un plasmide

Je me demandais si je n'aurais pas mieux fait de commander les oligos avec le site de restriction suivi de quelques bases afin d'annhealer puis couper par mes enzymes Est ce que effectivement mon problème peut venir de là.  [...] Moi je fais comme tu le décris avec les sites compatibles en 5' et 3' de mes oligos. Tu veux dire transformation du produit de ligation Tu fais une ligation de ton plasmide et tes oligos hybridés Quel rapport tu utilises.  [...]

Enzymes de restriction

bonjour. nous faisons un tpe et nous aurions besoin de savoir ou nous pourrions trouver des enzymes de restriction pas cher de préférence. site internet ou catalogue.  [...] ça grâce à l'activité des enzymes de modifications qui fait la méthylation au nivaux de ces sites de restriction c'est une mécanisme de protection contre l'autorestriction qu'il possèdent les microorganismes.  [...]

[Biochimie] Linker, enzyme de restriction and co

Je n'ai pas très bien compris ce qu'était un (poly)linker. Je crois que c'est une séquence qui est reconnue par de nombreuses enzymes de restriction mais à qu'est ce que c'est précisément.  [...] Un polylinker est une région d'un plasmide contenant plein de sites de restriction, souvent uniques. Ce sont ces divers sites qui sont reconnus par les enzymes respectives. Tu peux rencontrer aussi le terme MCS, pour Multiple Cloning Site (ou Site de Clonages Multiples).  [...]