• Santé - Site, Coupure, Protéine

[Biologie Moléculaire] Site de coupure à la TEV protease

J'ai une question très simple. Est il possible qu'un site de coupure à la TEV se 'coupe tout seul' c'est à dire que la protéine de fusion se sépare A quoi cela peut il être du.  [...] pour répondre a ta premiere question, tout depend d'ou se situe le site de coupure. S'il est entre deux domaines protéiques, alors il y a souvent des clivages de protéases.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

Que voulez faire exactement Si c'est pour éliminer le tag, plusieurs options existent déjà telles qu'intercaller un site de coupure pour une enzyme spécifique entre le tag et la protéine d'intérêt.  [...] Par exemple, dans la série des pGEX (plasmide GST), les plasmides pGEX T introduisent le site de coupure par la thrombine, les plasmides pGEX X introduisent le site de coupure par le facteur Xa et les plasmides pGEX P introduisent un site de coupure par la protéase presission (ca doit être une enzyme propriétaire ça).  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation de la trypsine pour un test de repliement des protéines

Je viens de découvrir une nouvelle méthode qui consiste à traiter des extraits cytoplasmique avec de la trypsine (1, 3, 10...µg/ml) pendant 5 min, faire un western blot avec un anticorps pour la (les) protéine(s) d'intérêt et regarder si les bandes observées sont à hauteur attendue (bonne taille en KDa), ou avec des tailles inférieures ou si elles ont complétement disparu.  [...] Si les protéines sont résistantes à un traitement à la trypsine à forte concentration c'est qu'elles sont bien repliées et donc moins accessibles à cette protéase.  [...]

Rénine

Une exopeptidase coupe la liaison entre le premier aa et le second (ou dernier et avant-dernier). D'après ce que j'ai pu voir sur l' angiotensine, il n'est pas question de cliver uniquement un acide aminé, mais plusieurs en une fois, donc il s'agirait bien d'une endoprotéase à mon avis.  [...] d'accord avec Gordak. Le site de coupure ne se trouve pas en bord de protéine, donc endo. (même principe avec les endo/exonucléases).  [...]

Science décalée : bientôt du porc génétiquement allégé

Pour introduire cette mutation chez les cochons, les chercheurs ont utilisé l' édition génomique, et plus précisément le système TALEN ( Transcription activator-like effector nuclease ). il s'agit d'une enzyme qui coupe l' ADN, attachée à une protéine qui se lie à l'ADN.  [...] La protéine guide l'enzyme de coupure vers un site particulier, ici le gène MSTN, et ensuite l'enzyme le coupe. Le système de réparation de la cellule répare ensuite l'ADN mais en commettant des erreurs, ce qui rend le gène non fonctionnel. Une cellule dans laquelle TALEN a rendu les deux copies du gène MSTN inactives a été transférée dans une cellule-oeuf qui a servi à créer 32 clones de petits cochons.  [...]

[Biologie Moléculaire] purif des proteines recombinantes apres coupure au facteur X

Apres passage par la colonne Nickel pour récupérer la protéine recombinante (sachant que la chaperonne fait 50 Kd et ma proteine d'interet fait 25 Kd) comment dois-je procéder (après coupure au facteur X) pour récupérer le maximum de protéine et éliminer tous l'imidazole (l'imidazole est dangereux pour la suite de ma manip).  [...] la carte de mon plasmide est comme suit. une Chaperonne située en 5' (appelée Trigger factor. cela facilite le bon repliement de ma proteine d'interet et augmente d'une facon tres significative la solubilité de la proteine recombinante) suivi d'un His-tag puis du site de coupure du Facteur Xa et à la fin le Multiple cloning site.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

2-la question est bizarre, mais j'imagine qu'on te demande de faire la différence entre le site de fixation de l'enzyme et le site de coupure (certaines enzymes ne coupent pas la ou elles se fixent).  [...] Selon moi, la chose relève plutôt de l'endroit où se produit la coupure, pas des agents. Surtout, je ne vois pas comment un site de restriction sera présent sans que le site de coupure y soit (mutation ponctuelle exclue).  [...]

extraire de l'ADN

Pour le reste, certaine enzyme de restriction sont effectivement incapable de couper l'ADN si celle-ci es méthylée au niveau du site de coupure (à l'inverse il existe des enzyme qui cliveny spécifiquement ces sites).  [...] La méthylation (dans le cadre de la protection contre des enzymes de restriction) est effectué par des méthyltransférases qui vont reconnaître un site de coupure d'une enzyme de restriction et vont ajouter un groupement méthyle au niveau de ce site (souvent au niveau d'une cytosine).  [...]

Southern blot et séquençage - Interprétation

Question 2. Traduisez la region d'interet pour les deux individus en commenc'ant la lecture a la premiere base (Figure 2, NB. il s'agit du brin +), positionnez le site de restriction de Xho I sur la ou les sequence(s), donnez toutes les caracteristiques de l'evenement mutationnel en affinant votre reponse de la question 1.  [...] J'ai également besoin d'aide sur cet exercice, pourquoi avoir utilisé le brin matrice pour apres repérer le site de coupure de l'enzyme de restriction, n'est il pas possible de le faire avec le brin neosynthétiser.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

ça pourrait être du à l'utilisation d'une technique de TAP-tag. Tu fusionnes ton ORF à une étiquette tripartite. 2 motifs permettant la purification (6His et prot A par exemple) séparés par un site de coupure par une protéase (TEV en général).  [...] Tu fais une première purification et tu sors ta protéine plus des protéines aspécifiques. En coupant tu détaches de ta colonne uniquement ta protéine (ou presque), et tu repurifies après. Au final la deuxième purif donne une protéine plus pure que la première (moins de bandes parasites).  [...]