• Santé - Signal, Quantité, ADN

La longueur des télomères, garante de la viabilité des embryons ?

Cette technique utilise un morceau d'ADN couplé à une molécule fluorescente. Ces deux partenaires constituent la sonde, déposée sur les cellules d'intérêt. Grâce à la complémentarité de séquences, la sonde peut se fixer sur l'ADN cellulaire. A l'aide d'un laser, il est possible de quantifier précisément le signal fluorescent.  [...] plus le signal est fort, plus la quantité d'ADN qui s'est fixé est grande, et donc plus le télomère est long. Il est possible de corréler le signal à une longueur, mesurée en paires de bases (l'unité de l'ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel

Déjà, il faut comprendre ce qu'on observe. le paramètre mesuré est un signal dont l'intensité dépend de la quantité d'intercalant intercalé dans l'ADN double brin. Ainsi, la différence de signal entre le début et la fin du run correspond à tout ce qui a été amplifié pendant le run.  [...] ..). Pour cela, on construit une gamme de dilutions connues, et on regarde le signal que cela donne. Ensuite, on représente le Ct en fonction de la quantité d'ADN initiale (relative ou absolue), ce qui donne une droite dont la pente est proportionnelle à l'efficacité de l'amplification ( rendement ).  [...]

[Biologie Moléculaire] demande d'aide sur la PCR HRM

c'est exactement mon problème, quand je teste mes amorces sur l'ADN pure des souches de Leishmania ça marche très bien mais dés que je fais une autre HRM avec ces mm amorces Avec les ADNs extraits à partir de l'animal réservoir, j'obtiens toujours des Cp qui sont très élevées, et du coup le logiciel les prends comme des négatifs.  [...] Quelle quantité d'ADN avez vous par réaction Avez vous testé en gamme Pour info, 1ng/µL pour de l'ADN pur c'est beaucoup. Vous pourriez diviser par 1000 et avoir toujours du signal.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

La Q PCR c'est établir une gamme étalon d'un ADN controle ( Quantité d'ADN au départ connu) généralement un plasmide avec 1000, 10 000 100 000 et enfin 1 000 000 copies et définir pour chaque quantitées le nombre de cycle néssaires pour avoir un signal différent du bruit de fond (le cT) celui-ci est donc inversement proportionnelle à la quantitée d'ADN du départ.  [...] Je ne comprend pas pourquoi jmbowi dit que l'on devrai connaitre la quantité d'ADN du départ, car pour moi il n'y a alors aucune necéssité faire une Q PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

le programme classique de PCR ne marchant pas, il a été modifié (étape d'hybridation passé de 52 à 50°C) c'est avec ce changement+ des variations de quantité d'ADN que j'ai réussi a obtenir 1-2 fois un très léger signal (sur gel agarose 1%+BEt), mais depuis plus rien, tout a été testé (augmentation du temps d'élongation, des concentrations en ADN, passage de l'étape d'hybridation a 50 et 45°C durant 2min et température augmentée, TA cloning) je suis donc dans une impasse puisque je n'arrive pas a obtenir cet insert, donc si vous avez des idées je suis preneur. merci.  [...] Ah bah en faisant séquencer ya pas de souci ta séquence sera bonne... Dans mon labo certains n'étaient pas fan de la méthode car trouvaient ça trop cher mais au final quand tu met bout à bout toute's les dépenses plus le temps passé tu te rends compte que c'est TRES rentable.   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage en plasmides de grande taille via Sfi I (astuces)

Rapport vecteur.insert 1.10 ok mais tu utilises quelle quantité exactement d'ADN Et tu transformes avec quelle volume de ta ligation (pour quel volume de bactéries ).  [...] la digestion je la fais géneralement avec 1,5 µl d'enzyme 1Hà 37°C. mais comme le signal obtenu après dépos sur gel est trop faible, j'ai augmenté la quantité d'ADN digeré (80µL dans 350 final) avec 5µl d'enzyme de digestion 1h 37°C(j'ai essayé d'amplifier le fragment par pcr, ça ne marche pas).  [...]

[Immunologie] Test elisa

Donc deux cas possibles. 1) La quantité d'Ag est supérieur ou égale à la quantité d'Ac minimal pour avoir un signal positif (son titre). Dans ce cas la on à un signal positif.  [...] Par exemple pour un titre élevé ex 10000éme (donc un quantité d'Ac faible est suffisante pour détecter un signal) si on ne détecte pas de signal on peux avoir confiance dans le résulat car on sais que même avec une petite quantité d'Ag on aurai détecté quelque chose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Témoins positifs et négatifs PCR

Cela permettra de voir si un de tes composants est contaminé avec un ADN qui peut produire du signal, du coup si tu as un signal dans ton contrôle négatif, tu ne sauras pas si le signal obtenu dans tes échantillons est spécifique ou lié à une contamination (permet donc d'éviter les FAUX POSITIFS).  [...] Le contôle positif le plus courant est d'ajouter un fragment d'ADN connu dont tu es sur qu'il produira le signal attendu. De la même manière, si tu n'as pas de signal dans ton contrôle positif tu ne sauras pas si tes échantillons sont négatifs ou si l'amplification n'a pas fonctionné (permet donc d'éviter les FAUX NEGATIFS).  [...]

[Biologie Moléculaire] probleme de signal southern

J'utilise le kit de marque DIG Oligonucléotide 3'End Labeling de chez Roche, pour marquer une sonde ADN de 18 bases et le signal obtenu lors de mes manips est inutilisable. On voit bien qu'il ya de l'ADN mais ce n'est pas quantifiable.  [...] Quand je faisais mes southern, je les faisais avec une sonde marquee sur toute la longueur (elle etait plus longue d'ailleurs) avec un kit de chez Amersham. Mais normalement la dig marche bien, c'est ce que j'utilisais pour les EMSA. Tu as fais une quantification de ton marquage de la sonde (dilution en serie de ta sonde et revelation pour voir ou se trouve ton meilleur signal) Tu as essaye de faire synthetiser ta sonde directement avec la dig.  [...]

clonage overlap... problème

Tout d'abord est-ce que je dois designer mes primers en utilisant la séquence d'ADNg du gène codant pour ma protéine ou bien est-ce que je dois utiliser la cds ou la séquence d'ADNc.  [...] Comment est-ce que je peux identifier la séquence d'ADN correspondant au peptide signal de ma protéine (je connais le peptide signal mais je ne sais pas comment identifier quelle partie de la séquence d'ADN correspond à ce peptide signal). Est-ce que je dois faire un blastx.  [...]