• Santé - Séquence, Colonies, Sauvage, Mutations

[Génétique] Mutations sur le même allèle ou non

Mon encadrante m'a demandé de cloner l'ADNc du gène dans un vecteur pour ensuite le génotyper et le séquencer pour voir si les 2 mutations sont sur le même allèle ou non (ce qui est le plus probable). Le pb c'est que je ne comprends pas vraiment comment à partir du séquençage on pourra voir si les mutations sont sur le même allèle ou non.  [...] Oki donc si je comprends bien je vais devoir séquencer un certain nombre de colonies pour ensuite comparer la séquence obtenue avec celle de l'allèle sauvage non-muté et voir si sur la même séquence je retourve les 2 mutations ou si à chaque fois je n'en observe qu'une, ce qui signifierait que mes mutations sont sur des allèles différents... je m'égare pas.  [...]

séquençage

pouvez vous me dire comment je vais recevoir la séquence (dans quel format) et quelle sont les étapes pour lire les séquences par quels logiciels et comment chercher les mutations (les étapes de travail).  [...] Ca dépend de comment il sert séquence. Classiquement tu te retrouves avec un chromatogramme, avec ou sans fichier de séquence correspondant. Il existe plein de logiciels d'analyse des chromatogrammes. Pour chercher des mutations, le plus simple est d'aligner la séquence sauvage avec tes résultats de séquençages et de voir la ou ça ne colle pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse/clonage

en effet si l'insert de cDNA n'a jamais été séquencé il faut le faire. Il faut évidemment que tu fasses attention aux eventuelles jonctions exons-introns pour t'assurer que tu as bien un cDNA mature de cloné. ensuite il faut t'assurer qu'il est complet (de l'ATG au STOP) voir meme que tu as quelques parties des régions UTR.  [...] Sa marche j'ai enfin ma mutation. Par contre petit conseil pour les prochaines laisser agir plus longtemps qu'une heure avec DPn1 car en piquant 3 colonies 2/3 était sauvage.  [...]

Mutagénèse dirigée

J'ai la séquence d'un gène codant pour une protéine sauvage et j'ai la séquence du gène codant pour la protéine mutée pour une espèce A. On sait donc qu'aux alentours de la position 200 on a un changement d'un acide aminé entre la forme sauvage et mutée.  [...] Dans un premier temps j'envisage d'aligner les séquences protéiques des 2 protéines sauvages et identifier l'acide aminé qu'il faudra modifier.  [...]

[Génétique] Révertants / suppresseurs

Maintenant imagine que ta mutation induise un stop precoce dans une proteine (changement TAT en TAA par exemple). Tu peux avoir une deuxieme mutation, au niveau de l'ARNt TAT qui va transformer ce dernier en TAA la stop va donc sauter, et la proteine va redevenir sauvage.  [...] Un autre exemple, imagines une mutation dans une sequence regulatrice qui va empecher la fixation d'un regulateur. Le suppreseur sera une mutation dans le regulateur qui va lui permettre de reconnaitre a nouveau sa sequence.  [...]

Test de complémentation

deux gènes diferents sont touchés. l'individu sera heterozygote +/mutant 1 et + sur mutant 2 pour ces deux gènes. Pour des mutations recessives, globalement il est sauvage.. donc on peut dire que les mutations complementent.  [...] Il suffit que toutes les protéines soient présentes (en une copie au moins) pour obtenir un phénotype sauvage. De la tu peux déduire que si il te manque une protéine, les deux mutations était dans le même gène (ou locus).  [...]

Mutation ?

Bonjour, pouvez vous svp m'expliquer comment identifier une mutation et repérer les différents niveaux de phénotypes qui en découlent et aussi m'expliquer les notions d'homo et hétérozygote et donc la notion de dominance.  [...] Pour identifier une mutation Ca dépend de pas mal de choses, si tu veux avoir le protocolle détaillé... Mais en général il suffit de séquencer la séquence pour savoir si elle est différente du gène sauvage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation d'un Southern Blot

Maintenant il faut se demander ce que signifie que l'on ne voit que la bande de 3kb en 2. La conclusion la plus évidente est qu'elle ne peut pas se fixer sur la bande 1kb. Il y a donc une mutation en aval du site E1. Et vous avez raison, ce n'est probablement pas une mutation ponctuelle. La sonde la bypasserait facilement.  [...] Une addition ne serait pas gênante vu que la séquence complémentaire ne serait pas modifiée, la sonde s'hybride toujours. C'est donc une délétion d'une répétition dans la séquence du gène sauvage.  [...]

[Evolution] mécanisme de correction des mutations génétiques, quelle utilité évolutive?

Mais attention. Le choix du brin référence dans cette re-synthèse est totalement aléatoire. on a 50% de chance d'éliminer la mutation et 50% de chance de la réécrire à la place de la séquence initale (on dit sauvage en biologie moléculaire). Il ne faut donc pas croire ce système infaillible, sinon aucune mutation ne serait conservée.  [...] Ensuite concernant l'utilité des mutations... Bah là encore, c'est aléatoire. Si c'est une mutation qui dérègle le cycle cellulaire et provoque un cancer, c'est délétère. Si par contre c'est une mutation de résistance à un antibiotique, ça fait chmire les humains mais ça avantage vachement une bactérie mutante sur ses consSurs sauvages et donc sensibles à l'antibiotique.  [...]

mutation génétique

il peut arriver énormément de choses à la protéine. La transcription/traduction se déroulera normalement, et par exemple, si tu avais AAA CCC GGG AAA TTT (...) comme séquence sauvage, et qu'après mutation tu obtiens AAA CC GGG AAA TTT (...), tu auras donc comme codons. AAA CCG GGA AAT TT (...).  [...] une délétion hors phase a des conséquences dramatiques sur la séquence, d'autant plus qu'elle se produit en début de séquence codante. Dans le cas d'un décalage de cadre, en général on tombe très très rapidement sur un codon stop, donc en plus d'avoir une protéine qui n'a rien à voir, elle a des chances d'être raccourcie.  [...]