• Santé - Séquence, Aide, Plasmide, Bactérie

[Biologie Moléculaire] Librairie de génes !!

Bonjour tout le monde, c'est quoi une librairie de génes elles peut être façonnées par des souches d' E.coli...merci bien.   [...] Pour moi c'est comme une banque de gènes. C'est à dire qu'on a trouvé à quoi le gène correspond et on le conserve dans une banque. Pour cela on introduit la séquence à l'aide d'un plasmide dans une bactérie souvent E.coli (parce qu'on l'aime bien.). Et puis quand on en a besoin, on décongèle et la bactérie se multiplie et amplifie la séquence d'intérêt que l'on récupère et voilà.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Lorsqu'on rajoute une séquence à un plasmide (à l'aide d'un PCR), cette nouvelle séquence à 50% de chance d'être bien placé et 50% d'être inversé. (cf. photo).  [...] fin de ta sequence-HindIII-NNNN), ceux ci désignent des bases qui peuvent éventuellement séparés les 2 sites de restriction sur ton plasmide qui ne sont pas forcément côte à côte.  [...]

[Biochimie] insertion de séquence chez des eucaryotes

Petite question. Lorsque l'on introduit une séquence (par exemple dans un plasmide) pour l'amplifier dans une bactérie, je vois bien comment ça marche, mais pour les eucaryotes, comment fait-on pour insérer une séquence dans le noyau et pas seulement dans le cytosol A part la micro-injection, je vois pas très bien.  [...] On profite de certaines phases cellulaires où la membrane nucléaire est dissociée Les séquences entre d'elles-mêmes par les pores nucléaires.  [...]

[Biotechnologie] Bioluminescence par bactéries recombinées

En effet j'aimerais savoir si quelqu'un peut me dire comment on peut créer une bactérie (E.coli) bioluminescente à partir d'une quil'est naturellement(opero, plasmide..). J'aimerais avoir pas mal d'nfo aussi sur comment cette nouvelle souche est induite par un métal et donc émet de la lumière.  [...] A partir d'un vecteur (plasmide, yac, bac...) vous transférer la séquence d'intérêt depuis la bactérie naturellement luminescente. POur se faire, clivez la séquence d'intérêt à l'enzyme de restriction adaptée (il y en a à foison selon les coupes franches ou cohésives).  [...]

[Microbiologie] le gene de beta-lactamase ?,???

Attention. Chez les bactéries, les gènes de résistance tels que ceux-ci sont souvent portés par un plasmide, transmissible par conjugaison bactérienne.  [...] excusez moi,mais c'est la première fois que je rencontre ce lien,j'ai pas arriver a lire ces codes... Ma question c'était comment je connais le nom du gène de résistance au beta-lactamine d'une bactérie précise et sa localisation dans une séquence (soit sur l'ADN chromosomique, ou sur le plasmide),et la sequence de ce gène lui même.. svp vous pourriez m'aider,merciiii.  [...]

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel?

[Microbiologie] Un plasmide ouvert peut-il être fonctionnel.  [...] On a un plasmide circulaire avec x propriétés, on l'ouvre par digestion à un endroit vierge (sans gène d'intérêt) et on l'insère dans une bactérie. Est-ce que ce plasmide (linéarisé) est encore fonctionnel Personnellement j'imagine qu'un plasmide tronqué ça fait un peu désordre puis bon on a quand même séparé une séquence en deux (toute séquence à un intérêt) en petit 2 je pense également que des exonucléases bactériennes pourraient l'éliminer.  [...]

[Biochimie] Travaux pratiques de biochimie des systemes integrés urgents

En général juste pour la fluorescence tu transfecte la cellule avec un plasmide contenant la protéine d'interet suivie de la GFP (ou EGFP pour les eucaryotes je pense) Il s'agit d'une construction à faire à l'aide par exemple d'un plasmide EGFP dans lequel tu insères ta séquence d'interet (mais les manips sont longues, il faut compter un mois au moins).  [...] Le protocole de ceci comprend une première PCR pour produire ton gène d'interet à l'aide de primer possédant des extrémités suplémentaires contenant un site de restriction semblables à ceux présents sur ton plasmide EGFP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Colonies de bactéries

Je suis actuellement entrain d'effectuer une modification de BAC par recombinaison homologue dans la bactérie DH10B. Je viens de transformer mes bactéries qui contiennent le BAC avec le plasmide contenant la séquence que je veux insérer dans ce BAC. Après l'electroporation, mes bactéries ont poussées sur un milieu contenant des antibiotiques appropriés montrant que certaines ont bien intégrer le plasmide et que celui ci a du s'intégrer dans le BAC (le plasmide contient une origine de réplication qui ne lui permet pas de se répliquer de façon autonome dans ce type de bactéries).  [...] Es tu sur que ton BAC est en seul exemplaire dans la bacterie C'est un probleme courant lors de la mutagenese de plasmide multicopie. Une seule copie va integrer l'ADN qui tu as electropore, du coup resultat positif en PCR mais un mix de pas mal de chose (plasmide vide vs modifie).  [...]

[Biochimie] plasmides

Bjr tt le monde.En fait j'ai un petit souci et j'ai besoin d'aide.j'aimerai savent calculer le nombre de copies de plasmide contenu dans une bactérie connaisant le volume et le nombre de bactéries qu'on a au départ ainsi que le volume et le nombre de paire de bases du plpurifié à la finmerci.  [...] - la vitesse de croissance de tes bactéries, et donc combien tu en as au final.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dominant négatif

bonjour tout le monde, est ce que quelqu'un peut m'expliquer comment ça marche concrètement une expérience de dominant négatif j'ai ma lignée cellulaire ou je veux éteindre ma protéine, je les transfecte à l'aide d'un plasmide contenant la séquence mutée et je la trouve ou cette séquence et le plasmide ça s'achète ma question est peut être bête mais je n'ai jamais fais ça alors j'ai besoin d'éclaircicements, merci.  [...] Où trouver un dominant négatif Soit il est déja caractérisé dans la littérature, auquel cas tu peux contacter le labo qui a publié pour avoir le plasmide, ou bien il est commercialisé, sinon, il faut le faire. La ce sera de la mutagénèse dirigée, mais concernant le site à muter, cela dépend de la fonction de ta protéine que tu souhaites éteindre.  [...]