• Santé - Séquence, ADN, Amorces

amplification de l'ADN

Il est stipule que l'ADN-polymerase a besoin d'amorces en bout de sequence pour pouvoir la dupliquer. Cette amorce doit correspondre exactement avec le debut (ou fin) du brin d'ADN que l'on veut dupliquer.  [...] L'amorce sert de point de départ pour la réplication. Et effectivement on connait sa séquence. quand tu fais de la PCR tu connais la séquence du fragment d'ADN que tu veux amplifier, et c'est toi qui choisis les amorces et tu peux les faire synthétiser.  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

Si on veut savoir si cet individu est porteur d'un virus du sang, on va utiliser des amorces spécifiques d'une séquence du virus en question, et la PCR amplifiera cette séquence et cette séquence seulement, au détriment de tout le reste de l'ADN, qui était beaucoup plus abondant au départ (puisque le génome humain est beaucoup plus long que celui du virus).  [...] Je comprend maintenant que la PCR est avant tout un outil pour amplifier l'ADN. Cependant, il semble évident qu'il soit nécessaire de connaître la séquence de la mutation recherchée pour utiliser des amorces adaptées.  [...]

Biochimie PCR

je cherche a savoir comment peut on trouver une séquence a amplifier d'un adn (ex.Adn lambda), quand on connait seulement les deux amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Télomèrase et télomère

L'ARN de la télomérase (CCCUAA) s'hybride avec la séquence répété télomérique TTAGGG à l'exrémité 3' du brin anti-sens. Là, la télomérase commence la synthèse des télomères en utilisant son ARN comme matrice et l'extrémité 3' du brin d'ADN comme amorce. La télomérase synthétise alors un ADN simple brin.  [...] Puis, la primase associé à l'ADN polymérase ± ajoute plusieurs amorces espacées de 200 nucléotides sur la séquence télomérique allongée par la télomérase. A ce moment, l'ADN polymérase ´ finit la synthèse du dernier fragment d'Okasaki, puis elle synthétise le brin complémentaire de la séquence télomérique En final, le télomère serait un ADN double brin, c'est bien ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] D'une protéine à un gène à une protéine

Je sais qu'il est aisé de déterminer la structure primaire d'un protéine (et donc d'un anticorps) et de procéder à une reverse-translation d'une telle séquence d'acide aminés en une hypothétique séquence nucléique. Mais cela peut-il être juste ainsi.  [...] En revanche, il est possible de synthétiser l'ADN correspondant à la protéine séquencée. Cela s'appelle la méthode des gènes synthétiques. Il suffit de prendre des amorces recouvrant toute la séquence voulue. Les amorces sens et anti-sens s'hybrident en partie sur toute la séquence d'intérêt, on met une Taq sans activité 5'-3' exonucléase qui va combler les espaces.  [...]

Questions sur la PCR

Sinon oui on mets l'ADN total, les amorces sont normalements assez longues pour pouvoir s'hybrider que sur la séquence qu'on veut amplifier.  [...] Ton but si j'ai bien compris est de déterminer si une personne à 1 ou 2 copies du segment d'ADN génomique donné dans son génome. La PCR va amplifier ton segment. Si ton segment est représenté par deux alléles différentes tu auras deux produits de PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] inverse PCR

L'inverse PCR est utilisée pour amplifier l'ADN avec une seule séquence connue... Et oui car pour une PCR classique tu as besoin de 2 amorces.  [...] Du coup, on peut l'utiliser pour déterminer des localisations d'insert, amplifier une séquence ADN dont une partie est inconnue.  [...]

[Microbiologie] Problème pour l'analyse d'un article

Alors j'ai regardé vite fait et je pense qu'il s'agit d'un séquençage par extension d'amorces. Les lettres à gauche sont les 4 oligonucléotides A, T G et C composant la séquence d'ADN et les bandes en dessous indiquent quand il y a un A, un T, un C ou un G dans la séquence. Elle se lit en partant de ton amorce.  [...] Il ne reste plus qu'à regarder sur le gel séquençage à quelle base il correspond pour connaitre le point +1. Ainsi, en déterminant la séquence en amont et en aval de ce point, on connait sa localisation précise. Toutefois, il ne faut pas oublier de reverse-complémenter la séquence obtenue pour être en présence de la séquence codante, puisque l'extension d'amorce et le séquençage se font sur le brin non codant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

Eh bien je n'ai jamais étudié la question, mais il y a deux méthodes qui me viennent à l'esprit pour synthétiser des ribosondes. Soit tu fais une transcription in vitro à partir de la séquence d'ADN voulue, soit tu fais de la synthèse en phase solide, utilisée aussi pour faire des sondes ou amorces d'ADN et des peptides.  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

PCR et vecteur de clonage

Mais tu dois de toute façon connaître un minimum la séquence que tu veux amplifier de manière à pouvoir élaborer tes primers (=amorçes qui vont encadrer la séquence à amplifier sur chacun des 2 brins). Dans le cas d'espèces peu connues génomiquement parlant, tu peux utiliser une sauce d'amorçes dégénérées qui va être un mélange de primers permettant une hybridation plus ou moins efficace avec ta séquence cible (c'est très simple à comprendre avec un shèmas.).  [...] Tu peux faire une PCR avec des amorces spécifiques d'une séquence pour en vérifier la présence dans un ADN donné. Par exemple à la suite d'un clonage, après sélection des transformants sur antibotiques/marqueur, avec des amorces spécifiques à l'insert, tu peux rechercher les transformants dont le vecteur a intégré l'insert d'intérêt.  [...]