• Santé - Séquençage, Clonage, Séquences

[Génétique] Séquençage de l'ADN

Date d'inscription novembre 2012 Localisation Phoenix (Oran-Algérie) Messages 1.   [...] on a étudier les différentes méthodes de séquençage de l'ADN. la méthode chimique de Maxam et Gilbert et la méthode enzymatique de Sanger ainsi que le séquençage sans clonage. j'ai pas compris le principe concernant cette dernière et non plus comment analyser les séquences selon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage vs PCR pour séquençage?

J'ai quelques difficultés à comprendre pourquoi dans un séquençage shotgun on utilise nécessairement un clonage des séquences, tandis que pour du pyroséquençage on peut simplement utiliser une PCR ce qui rend l'opération beaucoup plus rapide. Il doit y avoir une subtilité que je ne vois pas dans les protocoles, qui empêche d'utiliser une simple PCR pour du shotgun, mais je vois pas laquelle.  [...] Je ne vois pas de raisons théoriques si ce n'est que les sequençages à partir de PCR sont toujours moins beaux que ceux effectués à partir d'un clonage. Les amorces doivent avoir du mal à s'apparier sur le fragment PCR qui n'est pas surenrouler.  [...]

[Génétique] amorce et amplifiat

Bonsoir à tous svp svp je me demande s il y a quelqu'un pour me répondre à cette question. j'ai désigné une paire d'amorces mais ce dernier m'a donné un amplifiât qui, après clonage et séquençage a donné des extrémités qui ne correspondent ni aux séquences des amorces ni au début de la séquence attendue bien que le reste de la séquence soit intact.  [...] Comment peut-on expliquer ça c très urgennnnnnt.merciiiiiiiiiiiiiiiii d'avance.   [...]

[Biologie Moléculaire] Différence entre vecteurs de clonage et vecteurs de séquençage ?

Différence entre vecteurs de clonage et vecteurs de séquençage.  [...] Mon prof de Bio Mol a fait remarqué que les vecteurs utilisés pour le clonage moléculaire (plasmides, phages,...) étaient différents des vecteurS de séquençage (utilisés pour le séquençage de l'ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] aide sur le séquençage de l'ADN

En envoyant les amorces avec lesquelles vous avez fait la PCR (si ce ne sont pas des amorces universelles) au prestataire qui fait le séquençage, vous pourriez vous épargnez le clonage.  [...] Cloner puis séquencer est aussi préalable à l'expression du gène dans un système hétérologue... Du coup, on comprend le pourquoi du clonage avant le séquençage (encore faut-il qu'il s'agisse d'un vecteur d'expression si c'est vraiment là, le but de la manoeuvre).  [...]

protocole d'extraction d'ADN

Pour vous aider, il faudra connaitre la finalité de cette extraction. clonage, séquencage, etc.  [...] La bactérie la plus utilisée en clonage est E. col i. C'est une bactérie gram-. Si vous cherchez un protocole d'extraction d'ADN, la plupart que vous trouverez concerneront cette bactérie.  [...]

[Microbiologie] évaluer la diversité

je suis en train d'analyser un échantillon médical quant a sa composition bactérienne. Donc sur un nombre donné de clones analysés, j'ai tant de clones de différentes espèces. Pour certaines espèces, je ne détecte qu'un clone. Il est donc fort probable qu'il existe des espèces que je ne détecte pas, même si elle sont présentes.   [...] La composition de l'échantillon a été analysée par culture (des dilutions étalées sur un milieu solide et cultivée en anaérobie, 96 isolat identifies par séquençage du 16S) et par la méthode moléculaire (PCR 16S sur l'ADN total, clonage, séquençage de l'insert pour 96 clones).  [...]

[Microbiologie] resistance aux ATB

Avec les nouvelles méthodes de séquençages, c'est plus rapide. Juste besoin d'avoir un clone et de séquencer la totalité de son génome.  [...] Il est bien possible d'isoler et d'amplifier le gène que l'on supconne d'avoir muter via un PCR, cloner ce morceau dans un plasmide receveur (ultra simple), puis de séquencer ce plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Les applications cliniques de la PCR

l'étude de expressions des gènes (RT-PCR), la médecine légale, agroalimentaire (OGM), diagnostics, évolutions, sonde, clonage, criblage, séquençage...etc.  [...] La PCR est utilisée pour identifier une cellule ou un virus grâce à son ADN, ou toute maladie génétique par amplification de séquences spécifiques.  [...]

Clonage haut débit

J'aimerais savoir ce que l'on entend par clonage haut débit (et pas séquençage haut débit).  [...] De prime abord, je dirais qu'il s'agit de clonages en masse, plusieurs réactions/clonages dans différents tubes à essai, de manière automatisée.  [...]