• Santé - Séquençage, ADN, Fragment

But d'une PCR

j'aimerais comprendre a quoi sert une PCR je sais que c'est pour repliquer une sequence d'ADN autant de fois qu'on veut, l'amplifier... mais ca sert a quoi ici par exemple pour la CHIP, comment on peut retrouver une sequence specifique en amplifiant l'ADN je suis tres confuse.  [...] Tu immunoprécipites une protéine. Celle-ci est accrochée à un fragment d'ADN. Du coup tu récupères ce dernier. Mais ta machine de séquençage sera bien incapable de séquencer une seul brin d'ADN. Il faut d'abord que tu l'amplifies.. Ainsi tu auras des centaines de copies et la machine sera capable de faire le séquençage.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Cette manip te permet de visulaiser quelles colonies (et donc quels plasmides) contiennent ta sequence d'interet (tu auras un spot noir sur ta photo). Ensuite, il ne te reste plus qu'à recuperer les colonies identifiées sur ta deuxieme boite de petri (identique à ta membrane de nitrocellulose puisque replique), a les relancer en milieu liquide pour en extraire l'ADN plasmidique (manip 2).  [...] Tu vas pouvoir ensuite sequencer ton ADN plasmique, ou sous cloner si le fragment integré est trop gros pour un sequencage (manip 3).  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

si on connais la protéine synthétisé, on la digère avec une protéase puis séquencage aa ce qui permet de retrouver le fragment d'adn et donc le clone.  [...] S'il n'y avait qu'un seul site de clonage, tu aurais une grosse contrainte sur ton ADN de départ et donc presque jamais la possibilité de le découper pour en isoler ton fragment d'intérêt (ou alors, tu aurais à l'amplifier avec de amorces portant le site de restrictions, ce qui est plus lent et peut génerer des erreurs).  [...]

Marche sur le chromosome

marche sur le chromosome Stratégie pour la cartographie et le séquençage d'un fragment d'ADN ainsi que pour le clonage positionnel. De grands fragments de restriction (ou clones de BAC) sont générés et, après criblage, un point de départ unique est identifié.  [...] De nouvelles sondes complémentaires à des séquences du même fragment mais adjacentes au point de départ (clone BAC) sont synthétisées et ensuite utilisées pour identifier de nouveaux fragments de restriction chevauchant le point de départ initial. Le procédé est répété, en s'éloignant progressivement du point de départ.  [...]

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger.   [...] Après l'amplification d'un brin matrice par PCR, il y aura des produits PCR, pour un séquençage par la méthode de sanger, ces produits pcr doit être purifiés mais lors de la réaction de sanger, comment on évalue la concentration d'ADN, c'est à dire après la PCR on obtient plusieurs fragments d'ADN alors que par la méthode sanger c'est un seul fragment qui sera séquencer à ma connaissance.  [...]

L'existence du Yéti prouvée de manière "irréfutable" ! - Page 2

Pourtant, ils prétendent avoir des poils de la bestiole et à partir de là ça prend au très grand maximum un mois pour avoir la preuve par l'ADN et quinze autre jours pour rédiger la brève à publier dans Nature. Comme ils n'ont pas obtenu cette preuve, ce n'est pas difficile de deviner que le séquençage a révélé qu'il s'agissait de poils de canis lupus ou d'une autre bestiole qui n'a rien de mystérieux.  [...] A des détails près, toutes les cellules de l'organisme partagent le même génome et on ne peut donc déterminer le type d'une cellule à partir de sa séquence génomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] le séquençage??? une petite question

vous savez que le séquençage de l'ADN consiste à déterminer l'ordre d'enchaînement des nucléotides d'un fragment d'ADN donné.  [...] Tu pars d'un produit d'amplification par PCR du fragment que tu veux séquençer et tu ajoutes une amorce (dans le bon sens STP) pour demarrer la reaction.  [...]

L'Hominidé de Denisova : un nouveau cousin vieux de 30.000 ans

La même équipe, complétée par d'autres chercheurs et toujours menée par Svante Pääbo, vient de publier un article dans Nature portant sur le séquençage du génome porté par l'ADN extrait d'un fragment de doigt d'une petite fille âgée de cinq à 10 ans lors de sa mort.  [...] Mettant à profit son expertise acquise avec l'analyse du génome de l'Homme de Néandertal, la nouvelle équipe menée par Pääbo a rapidement entrepris de séquencer le plus possible de l'ADN de l'Hominine fillette de Denisova, miraculeusement bien conservé dans le fragment de doigt.  [...]

[Microbiologie] Problème pour l'analyse d'un article

a ok, donc une fois qu'on a fait l'extension d'amorce on fait migrer le fragment et pour savoir ou est le +1 on regarde sur les bandes sur la gauche (ou on a séquencer l'ADN) et on regarde dans quel position il se trouve.  [...] On réalise la même expérience sur l'ADNg (même amorce mais avec Taq DNA polymérase) sauf que là on fait un séquençage. Au niveau du point +1, on aura donc un fragment faisant la même taille que le fragment généré par l'expérience de RT. En accolant les gels où on a fait migrer les produits des deux expériences (RT et séquençage), on peut donc voir les bandes qui s'alignent.  [...]

Séquençage de l'ADN

pour ce squencage on utilise des primers. on peut donc séquencer spécifiquement un fragment parmi une grande variété d'ADN. La plupart du séquençage se fait sur double brin.  [...] Contrairement a la PCR classique, qui utilise un couple d'amorces (qui du coup borne la zone amplifiée), on n'utilise qu'une seule amorce en séquençage. Du coup, à chaque cycle, l'amplification démarre depuis cette amorce et sur un seul des deux brins, il peut y avoir n'importe quel autre ADN qui traine, il ne sera pas amplifié tant qu'il ne comporte pas la séquence de l'amorce.  [...]