• Santé - Sens, Amplification, Amorces

Exercice PCR

Bonjour, je dois donner la taille des séquences (pb) qui seront amplifiées par PCR pour chacune des associations possibles des amorces utilisées.  [...] Regardez cette animation. si les deux amorces sont choisies sur le même brin et donc s'hybrident du même coté, il n'y a pas d'ammplification.  [...]

Question sur le fonctionnement des amorces en PCR

En fait il ce passe quoi sur l'amplification PCR si l'amorce sens 5'-. 3' est définie sur le brin antisens avec comme orientation 3'-. 5' et l'amorce antisens est sur le brin sens avec pour orientation 3'-. 5' et du cou pareil mais avec l'inverse soit avec des orientations 5'-. 3'.  [...] Le sens de l'amplification ne dépend pas des amorces mais de la DNA polymerase qui ne va que dans un sens. A partir de là, vous devriez pouvoir imaginer ce que cela vous donnerait de faire comme vous l'entendez.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et mauvaise amorce

Je dirai que oui, cette base pourrait être à la base de ton problème. Les amorces font partie des points critiques de la PCR. J'ajouterai (mais cela est sujet à vérification) que du fait que cette base se trouve au milieu, la zone couverte par l'amorce n'est pas suffisante pour la polymérase.  [...] Ce m'inquiettait surtout, c'est le fait de ne vraiment absolument rien voir sur mes bandes, alors que je me serait attendus a un smear. Mais en effet il m'a suffti de faire un piti schemas sur un bout de papier pour comprendre que avec une seul amorce, l'amplification n'etait pas exponentiel et donc trop faible pour etre visible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Détection des OGMs et PCR originale

Pour le moment l'idée et de trouver une (voire 2 ou 3) amorces biotinylées pour amplifier les séquences ogms de façon linéaire et non exponentielle (pas d'amorce sens), de purifier les amplicons avec des billes magnétiques de streptavidine et de recommencer l'amplification à partir des amplicons et d'amorces RAPD.  [...] En fait, en comparant les constructions de différents ogms, nous avons trouvé des séquences communes au niveau de promoteurs ou de terminateurs. L'important est qu'il y ait amplification des événements vers la sortie de la cassette. nous avons donc choisi 3 amorces aptes à amplifier (nous l'espérons.) 3 ou 4 ogms chacune.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Si ta PCR fonctionne bien et est bien optimisée, ta concentration d'amorces est suffisantes pour l'amplification, donc une fois que ta PCR est faire, elles seront devenues les amplicons, donc tu as plus beaucoup d'amplicons. Sachant que ce sont quand même de petits fragments, il y a peu de molècules de BET qui peuvent se fixer dessus.  [...] Donc pour que tu vois tes amorces, faut que t'en aies beaucoup. Même beaucoup trop. Ca peut aussi expliquer tes problèmes d'amplification si les amorces ont été mal designées, ou pas faites en ce sens. Il se peut qu'il y ait des dimérisations, cad qu'elles s'hybrident entre elles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amorce sens et antisens

l'amorce antisens et complementaire à la sequence cible pourtant les 2 amorces doivent hybrider avec l'ADN complémentaire pour débuter la réaction PCR.Je ne sais pas est ce que ma question est claire ou non mais lors de la comparaison de mais amorces avec les sequence cibles sur le site NCBI voila ce que j'ai trouvé.  [...] Non une amorce s'hybride sur ce brin, l'amorce antisens, et l'amorce sens s'amorce sur le brin sens. Ainsi il y aura amplification de l'amplicon à la fin de la PCR.  [...]

[Microbiologie] Amplification d'un gène par PCR : choix des amorces

Je dois choisir les amorces Forward et Reverse pour amplifier la totalité du gène GAI (1500pdb) dont les codons initiateur et stop sont respectivement, ATG et TAG (soulignés dans la séquence).  [...] Voici la séquence. les deux amorces à utiliser doivent faire 20 nucléotides et le fragment amplifié doit être le plus court possible tout en contenant le codon initiateur et le codon stop.  [...]

[Biochimie] Problème d'amorces

La question est la suivante. Proposez les séquences (avec leur orientation) d'amorces de 20 nucléotides permettant d'amplifier l'exon 3.  [...] On me demande de proposer des amorces qui permettent d'amplifier la séquence de l'éxon 3 (en Majuscule), les amoces (de 20 nucléotides) devront être posées sur les séquences introniques (en amont et en aval). Seulement, j'ai appri que l'ADN polymérase synthétise de l'ADN dans le sens 5'-.  [...]

[Biologie Moléculaire] le séquençage??? une petite question

Tu pars d'un produit d'amplification par PCR du fragment que tu veux séquençer et tu ajoutes une amorce (dans le bon sens STP) pour demarrer la reaction.  [...] done dans le mélange on utilise pas uniquement d'une seul copie de fragment d'adn par contre plusieur copié transcrit par le pcr (amplifier).   [...]

[Biologie Moléculaire] pcr sur colonies clonage

J'essaye de faire un TA cloning d'un insert (1500pb) dans un vecteur pcDNA3.1 je fais des PCR sur colonies à l'aide des amorces qui m'ont aidé à amplifier le cDNA donc je m'attend à une bande d'environ 1500pb mais à la place de sa j'ai une bandes d'environ 200pb sur presque tout mes clones.  [...] J'ai utilisé la kit Qiagen avec succès pour extraire mon produit de PCR du gel d'électrophorèse. En revanche, je ne connais pas les autres kits. Je n'ai pas fait de clonage depuis maintenant deux à 3 ans, mais dans mon souvenir, je ne faisais pas de purification après la digestion, mais la ligation directement.   [...]