• Santé - Sélection, Clones, Levures

Levures roses

Je sais que cette coloration n'est pas naturelle mais est la conséquence d'un détournement de la chaîne de synthèse de l'adénine (c'est ce que j'ai vu dans un TP l'année dernière si mes souvenirs sont bons).   [...] Je crois que c'est un technique de sélection des clones mais je n'en suis pas sûr et je ne sais pas quel en est le principe. Mon autre hypothèse (ou souvenir lointain...) est que cela serait simplement la preuve que les levures ont consommé tout l'adénine du milieu et qu'un intermédiaire de la chaîne de biosynthèse de l'adénine s'accumulerait dans les cellules.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sélection des clones transformés

Lors de la sélection des clones ils ont ensemencé les levures sur un milieu contenant 100 ¼g/ml de Zeoccin, les colonies résistantes ont été repiquées sur le même milieu mais contenant cette fois ci 500 ¼g/ml de Zeoccin puis les colonies résistantes ont été sélectionnées.  [...] Ce que je ne comprends pas c'est pourquoi ne pas utiliser directement un milieu avec 500 ¼g/ml sans passer par un milieu de 100 ¼g/ml de Zeoccin Quel est l'intérêt.   [...]

[Biologie Cellulaire] Stabilité d'une transfection

Suite à une transfection réalisé grâce à de la lipofectamine j'ai une expression transitoire de mon gène d'intérêt, cependant pendant la phase de sélection avec le G418 de façons général toutes les cellules meurent et je ne peut pas récupéré de clone stables.  [...] J'ai toutefois réussi a récupérer 2 clones survivant à la pression de sélection suites a l'une de mes transfections cependant lorsque je dose ma molécule d'intérêt pour l'un des clones je n'obtiens rien et pour le second la quantité est vraiment négligeable.  [...]

[Génétique] Test de complémentation

Lorsque tu obtiens plusieurs clones bactériens ou de levures...mutant avec un même phénotype par exemple auxotrophie d'un acide aminé le phénotype résulte t-il du même géne muté ou y'a t-il plusieurs génes en jeu Autrement dit, tout les clones sont-il mutés dans le même génes ou non.  [...] Pour le savoir tu fais un test de complémentation. Cela consiste à mettre le génome (tout ou partie ) de la cellule A mutante dans la cellule B mutante est de voir si cela rétablie le phénotype sauvage ou pas.   [...]

[Immunologie] Immunologie : Maturation des Lymphocytes

Les lymphocytes T maturent dans le thymus. Apres acquisition d'un TCR par réarrangements géniques il y a dans le cortex du thymus une sélection positive des lymphocytes. Seul les lymphocytes dont le TCR peut se lier à un complexe CMH-peptide survivent. Ces lymphocytes ci reçoivent des signaux de survie suite a une interaction CMH-peptide-TCR.  [...] Puis dans le medulla du thymus il y a une sélection négative des lymphocytes. Les lymphocytes dont le TCR présente une trop forte affinité pour un CMH-peptide du soi sont éliminé (LT autoréactif).  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

contrôle-qualité de l'ADN recombinant. transformation dans E. coli, sélection des clones recombinants et extraction du vecteur d'expression.  [...] La méthode que Delirium m'a gentiement indiqué permet directement une sélection spécifique de l'Adnc avant clonage puisqu'on utilise des amorces spécifiques lors de l'amplification mais la sélection des clones d'intérêt au sein d'une banque d'adn na se fait-elle pas ensuite (une fois la banque construite) par criblage (hybridation avec une sonde specifique) où bien quel est l'intérêt de la banque.  [...]

transformation levures

Ah oui j'oubliai un truc important, quand les levures sont en LiAc elles sont fragiles, donc eviter les centrifugations trop longues et trop fortes, sinon tout est mort. Il faut aussi eviter les pipetages intenpestifs car le passage dans le cone est une etape delicate.  [...] Lors de mon M1 j'ai laissé mes levures à 42°C pendant 3/4h au lieu de 1/4h et ça a marché. Bon d'accord j'avais moins de clones sur boîtes mais ça a marché.. donc tu devrais quand même t'en sortir je pense.  [...]

[Biologie Moléculaire] conversion d'un plasmide

J'aimerai savoir si il était possible d'ajouter une origine de réplication et tout de suite après un marqueur de sélection afin de pouvoir sélectionner des clones.  [...] En fait la question est surtout sur la distance entre l'ori et le marqueur car dans tous les plasmides que j'ai, et que j'ai vu, il y a toujours une distance entre les différents éléments du plasmide. Or ici je veux essayer de garder le plus possible la séquence d'origine.   [...]

clonage

Slt g une question. quel est le principe de alpha-complementation utiliser par les plasmides PUC et qui permet la selection des clones recombinants grace a LAC-z C urgent et merçi.  [...]

Adénovirus et cre-lox

(je parle du système de recombinaison dérivé du phage lamba je crois, RedEt. On prend 50pb flanquantes de chaque coté de l'emplacement qu'on cible et on fait deux oligos longs contenant chacun une région flanquante et une partie du gène à insérer, selon l'orientation, on fait une PCR avec sur le gène à insérer,puis recombinaison dans E coli.   [...] Il y a un système de sélection de clones modifiés post recombinaison, et c'est tout bon normalement, il y a des publis dessus, je peux donner les ref, si besoin).  [...]