• Santé - Sélection, Cellules, Plasmide

proteine ou cellule stable ???

i) transfecter avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt, puis effectuer sa manip sur les cellules (dans ce cas, toutes les cellules n'exprimeront pas la protéine, et celles qui le font, élimineront en quelques génération le plasmide).  [...] ii) transfecter stablement avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt et un gène de résistance, on ajoute un agent de sélection, donc seuls les cellules qui possèdent le plasmide survivent, et au final, il y aurait intégration du plasmide dans le génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

en fait jinsere un gene viral, dans un plasmide -. selection du bon plasmide dans des cellules bacteriennes (a laide de la selection AB), mais l'expression final du gene que je recherche doit se faire dans des cellules animales.  [...] dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...]

[Biologie Cellulaire] Plasmide eucaryote/bactérien dans une lignée cellulaire

Dans ta population de cellules après transfo seulement une partie a pris le plasmide. Si tu n'as pas de marqueur sur ce plasmide pour le sélectionner tu ne sauras pas si ta transfo a marché mal/bien/très bien et donc l'efficacité de ta transfo.  [...] Sur beaucoup de plasmide si tu ne maintient pas de pression de sélection le plasmide est perdu très rapidement et au final tu vas regarder des cellules sans plasmide.  [...]

Plasmide recombinant

On selectionne deja sur la résistance les cellules portant le plasmide. On a donc dans le lot des cellules qui portent le plasmide et des cellules qui ont recombiné. Ce que l'on veut maintenant c'est n'avoir plus que les cellules qui ont recombinées. Du coup on va les tester avec le gène de sensibilité à l'antibiotique.  [...] L'autre antibiotique permet la sélection dans un autre type de cellule (une culture cellulaire ou primaire). C'est l'étape de l'analyse, de l'essai biologique. par exemple quel sera l'effet du plasmide sur les cellules humaines.  [...]

Qu'est-ce qu'un OGM : organisme génétiquement modifié ? | Dossier

Si le plasmide possède un gène de résistance aux herbicides, ceux-ci peuvent être utilisés pour sélectionner uniquement les cellules porteuses du plasmide. Cependant cette stratégie de sélection est maintenant couramment remplacée par d'autres moyens de sélections n'utilisant ni les antibiotiques, ni les herbicides.  [...] La mise au point des plasmides a été fortement améliorée ces dernières années. Maintenant il est possible d'éliminer du plasmide tous les gènes de sélection utilisés dans les bactéries. Ainsi la cellule nouvellement OGM, ne possède pas de gène de résistance aux antibiotiques qui risquerait d'être disséminé dans la nature.  [...]

Faire suivre une promoteur eucaryote et procaryote

Dans la construction du plasmide il est précédé du promoteur du CaMV 35S. Cependant pour réaliser la selection des bactéries transformé puis des cellules végétales transformé, on a besoin de l'expression de NPTII à la fois dans les bactéries et les cellules eucaryotes.  [...] Ma question est donc a-t'on pu laisser le promoteur procaryote initiale de NPTII, précédé du promoteur eucaryote 35S pour avoir une expression dans les deux situation, cela fonctionnerai t'il d'avoir deux promoteur qui se suivent Où a t'on simplement fait deux copies du gène NPTII, un avec son promoteur initiale l'autre avec le 35S.   [...]

Plasmide

Si tu as cloné ton insert dans ton plasmide, tu as obligatoirement une étape de transformation après la ligation pour sélectionner les plasmides qui se sont recircularisés. Apres tu sélectionnes certains clones puis minipreps pour récupérer les plasmides. Sinon on fait aussi des mini/midi/maxipreps pour faire des stocks de plasmides.  [...] La selection des plasmides recircularisés se fait lors de la transformation de cellules électrocompétentes. Seules les cellules ayant reçu un plasmide recircularisé pourront croitre sur le milieu sélectif car seulement ces plasmides peuvent coder pour le gène de résistance en question (la sélection doit se faire sur Ampicilline je suppose ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

Pensez-vous qu'il soit possible d'isoler et purifier un plasmide (EBV = pas d'intégration et expression à long terme sous sélection) à partir de mes lignées cellulaires transfectées.  [...] Essayes de faire une miniprep sur tes cellules, comme on le fait pour les bactéries. Le problème est que les tampons risquent de ne pas être adapté pour cette situation et rien donner comme production. Je ne vois que cette solution en tout cas car les extractions d'ADN classique ne séparerons pas le plasmide de l'ADN génomique alors que les kit mini-, midi- et maxiprep le permettent...pour les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Juste une dernière précision. lorsque le shRNA est codé dans un plasmide, il n'a pas besoin d'être intégré dans le gênôme de la cellule hôte pôur être stable... Une simple pression de sélection par un antibiotique (par exemple) permet une transfection stable.  [...] Oui je rejoins LXR sur ce point, en dehors du cas bien particulier des vecteurs épisomaux, la pression de sélection va permettre de selectionner les cellules qui ont intégré le plasmide, sinon celui-ci est perdu au fur et à mesure des divisions cellulaires.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Transfecter un plasmide qui code pour une protéine permet effectivement d'étudier l'effet de la surexpression de cette protéine sur le comportement de la cellule. L'impact de la présence d'ADN exogène existe, mais elle est minime.  [...] Pour faire une selection des cellules transfectées, il faut par exemple que le plasmide possède un gène de résistance à un antibiotique (puromycine par exemple), ainsi seules les cellules transfectées vont survivre pendant une culture en présence de l'antibiotique.  [...]