• Santé - Rôle, Séparation, Protéines

Rôle de SDS dans la séparation des protéines par électrophorèse

Le SDS est un détergent qui va supprimer les liaisons non-covalentes ce qui va avoir pour effet de dénaturer toutes les protéines présentes. Il y a donc perte de conformation, ce qui fait que ces protéines ne seront différenciées que par leur taille (ou poids) et non par la conformation.  [...] Pour schématiser, les protéines vont toutes être droites sur la même ligne de départ et elles ne vont migrer qu'en fonction de leur poids moléculaire, les plus légères iront plus loin que les plus lourdes.  [...]

Extraction ADN phenol : température de centri

Je pratique des extractions d'ADN méthode phénol-chloroforme sur des produits alimentaires (bien gras et bien protéinés. C'est d'ailleurs pour cela que je ne prends pas des systèmes de kits et colonnes).  [...] Mais si quelqu'un pouvais m'éclairer sur le rôle de la température (par exemple sur la séparation d'avec les protéines, mais aussi l'extraction préférentielle de l'ADN vs ARN peut-être) ce serai super.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Voilà je voudrais savoir quel est le voltage adéquat pour séparer de protéines de 280 et 290 kDa, sachant que jusqu'à maintenant je n'ai pas pu le faire en utilisant des gel de 4-12% et 3-8% à 200V. Je sais qu'avec un SDS-PAGE la charge des protéines n'a pas de roles sur mobilité mais le voltage peut-il jouer un rôle sur la résolution de la séparation.  [...] Je profite de ce topic autour du page-sds pour vous demander un éclairage de ma lanterne s'il vous plaît. Nous avons évoqué cette technique de séparation des protéines selon leur masse dans le cadre de mon master 2, mais les protéines étant de composition en acides aminés différente, avec ce que ces derniers peuvent avoir de fonctions acides ou basiques différentes, je n'arrive pas à comprendre comme la charge globale d'une protéine dénaturée au page sds peut être la même entre deux protéines différentes.  [...]

[Biochimie] séparation des proteines par Electrofocalisation

je suis en 1er année de medecine, j'aimerai savoir si, quand on parle de séparation des proteines par éléctrofocalisation, on parle seulement de procédés qui mettent en jeux la charge, càd soit la chromatographie d'échange d'ion ou l' electrophorese Bi-dimensionnelle, ou si on parlait aussi de l'electrophorese monodimensionnelle càd sds-page sachant que cette méthode ne joue que sur la taille de la proteine.  [...] Non, le SDS-Page n'a rien a voir avec la charge, puisque par définition on migre en s'affranchissant de la charge des protéines.  [...]

[Biochimie] glycine

Dans le gel de resolving, la vitesse de migration des ions glycinates augmente dans le gel de séparation, car le pH du gel de séparation est de 8.8, donc les protéines sont moins rapides que les ions porteurs. Les protéines se font dépasser par les ions glycinates et les différents complexes protéines-SDS se séparent grâce aux pores du gel.  [...] Si le papier SDS-PAGE est tant cite c'est surtout parce que le tampon de depot des proteines dans un gel (quel qu'il soit) est le tampon laemmli. Les articles citent en fait la composition du tampon, plus que la methode de SDS-PAGE.  [...]

[Biologie Moléculaire] détermination du type d'électrophorese à sa vue.

je voudrais savoir si à la vue d'un gel d'électrophorèse, nous pouvons déterminer s'il s'agit d'un gel de séparation de proteines, ou d'un gel de séparation d'Adn.  [...] Pour le gel 2, il faut voir les taille, mais ca me semble pas incompatible avec de l'ARN en méga grosse quantité, ca ressemble à ce qu'on voit quand on expose un gel propre d'ARN trop fort.   [...]

[Biologie Moléculaire] Séparation des protéines: HPLC!!

en fait j'ai dans mon cours qu'on peut pas separer les proteines par HPLC, ça est due a quoi puisque les proteines peuvent etre polaire comme elles peuvent etre apolaire.  [...] en phase inverse, les composés polaires sont élués en premier (pour des protéines, les plus petites sortent d'abord). Ensuite, avec l'augmentation de solvent polaire dans le phase mobile (methanol, acetonitrile) les molécules hydrophobes (ou les grosses protéines) seront éluées.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion

je ne demande ni protocole ni determination du principe mais je demande comment manipuler car je n ai jamais fait de chromatographie d exclusion.   [...] Comment compte tu détecter les protéines dans l'éluaTu a un spectro raccordé Quels sont les protéines que tu sépare (masse moleculaire) Le domaine de séparation de ton gel.  [...]

Immunoblot

Une identification n'est pas le bon terme. On charge sur un gel un lysat cellulaire (par exemple) contenant des protéines. Ces protéines vont être effectivement dénaturées (ou pas d'ailleurs, tout dépend de ce que l'on veut voir) et chargées négativement. Le courant électrique permet de faire migrer toutes les protéines dans le même sens (puisqu'elles ont toutes la même charge) et de les séparer selon leur masse moléculaire.  [...] Entre la migration sur gel et l'autoradiographie tu as en plus une étape d'électro-transfert qui comme son nom l'indique permet simplement de transférer les protéines du gel vers une membrane (que tu vas ensuite utiliser pour faire l'autoradiographie), encore une fois grace à un champ électrique (car le sprotéine sont toujours chargées négativement).  [...]

[Biochimie] electrophorèse

Pourquoi faut il utiliser le rouge ponceau dans une séparation électrophorétique des proteines sériques.  [...] Mais d'ailleurs, j'avoue que je ne sais pas exactement comment fonctionne le rouge Ponceau, et je crois que c'est assez consensuel. J'ai demandé à un collègue biochimiste des protéines et il semble que ce ne soit pas vraiment définit.  [...]