• Santé - Révélation, UV, Bande, Méthode

extraction plasmide

je viens de faire digérer un plasmide avec une enzyme de restriction BSER1 puis je l ai purifiée et j ai eu deux barres avec la révélation sous uv mais la j aimerai extraire la deuxième bande pour que sa se recolle pas a mon plasmide mais je sais pas quel méthode utiliser.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme PCR ,la technique inverse-shifting PCR ,génotypage de l’inversion 22 hémophilie A

Cette technique comporte 3 etapes ( digestion enzymatique de l adn, ligation et PCR multiplex ), nous avons un profile attendu qu'on doit retrouver chez un patient qui porte l'inversion 22 qui est la présence de 2 bandes avec des tailles bien précises mais malheureusement on n'arrive pas à.  [...] voir ce profile là sur le gel. soit la PCR ne marche pas complétement et ne voit rien lors de la révélation ( sur plaque UV ) soit on retrouve qu'une seule bande.  [...]

principe d'électrophorèse

Je ne sais pas si ma question est claire EN gros je ne vois pas le rapport entre le principe théorique ( d'etre attiré par la cathode) et la séparation ( les bandes qu'on voit aux UV).  [...] Pour ce qui est de la révélation (les bandes vues aux UV), elles sont obtenues grâce à un composé présent dans le gel ou que tu ajoute par la suite (souvent du BET si je ne me trompe pas).  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'électrophorèse disparaissant ...

j'ai pas tout compris a ton histoire de hallo, en revanche pour tes bandes qui disparaissent c'est lié au fait que la longueur d'onde des UV que tu utilises n'est pas adaptée a l'observation de l'ADN.  [...] Pr l'histoire de halo. en fait, on utilise un tampon de charge qui contient trois colorants. xylene cyanol, bleu de bromophenol et orange G (Promega), les trois migrants environ à 4000, 300 et 50pb environ, respectivement. Quand on révèle sous UV, les taches correspondant aux colorants sur le gel sont sombres et ne genent en général pas la révélation, elles masquent légèrement ms rien de grave.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Attention les phages sont une forme de virus bactérien (à vérifier). Il y a ici deux facon de faire. Soit on construit des plasmides directement que l'on peut insérer dans des bactéries via des méthodes comme l'éléctroporation. Sinon les phages. un phage est une sorte de virus bactérien, constitué donc d'une capside et d'un acide nucléique à l'intérieur.  [...] Le reel clonage se situe en amont de la premiere manip. Il correspond en fait a une manipulation de l'ADN (en vue de l'insertion dans un plasmide par exemple). Evidemment, suite a ton clonage tu auras besoin de transformer des bacteries puis de verifier ton clonage (manip 1, 2 et 3).   [...]

problème de visualisation sur gel agarose

Ensuite lorsqu'on me présente le résultat de l'électrophorèse, je ne suis pas sûre d'avoir réelement compris ce qu'il s'est passé. Si le gel permet seulement de faire passer les fragments plus ou moins rapidement, celà voudraitdire qu'après un temps suffisament long ils finiront tous par atteindre la cathode et que les bandes qu'on voit en UV sont simplement un instantané de ce qu'il se passe Je veux dire le gel leur permet de migrer et les bandes que l'on voit représente l'endroit où ils sont en suspension.  [...] Les fragments sont de tout façon à l'intérieur du gel, le colorant va donc pouvoir s'intercaler dedans et une révélation aux UV sera alors possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème révélation WB

Pour la seconde révélation, augmentes-tu le temps d'exposition (l'activité HRP décroit au cours du temps...) La bande qui disparait, comment se situe-t-elle par rapport aux deux autres bandes (beaucoup moins intense, plus intense, équivalente,...).  [...] D'après ce que tu dis, je ne suis pas plus étonné de la disparition de cette bande lors de la deuxième révélation puisque c'est la moins intense de toutes. L'inverse aurait été surprenant. Là c'est juste que pour voir la bande en question, il faut exposer plus.  [...]

[Biochimie] Question Western Blot et Coomassie

Lorsque j'observe mon gel coloré au bleu de C. je vois bien de nombreuses bandes. Nous avons déposé deux conditions différentes. Et dans l'une d'elle j'observe une bande aux environs de 15kDa (ce qui correspond au poids de la protéine qui nous intéresse) qui n'est pas présente dans l'autre condition.  [...] Jusque là pas de souci, en revanche, après transfert et révélation (Ac primaire et secondaire contre ma protéine). La bande s'observe cette fois aux environ de 10-11 kDa.  [...]

[Biologie Moléculaire] utilisateur kit EMSA par chemiluminescence

Bonjour, cherche utilisateurs kit EMSA par chemiluminescence (Thermoscientific ou Active motif) pour échange expérience et problèmes à résoudre. Merci.   [...] C'est une méthode assez pointue, pas trop à la mode et que peu de gens utilisent, aussi si vous avez des problèmes particuliers je vous invite a venir poser vos questions. Pour ma part je connais l'EMSA radioactif, après la chemiluminescence n'est qu'une méthode de révélation alternative. Un problème en particulier.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

On a fait amplifier de l'ADN de certains de nos échantillons et on faisant migrer les produits sur gel, il s'est avéré que y a eu contamination (révélation d'une bande sur gel correspondant au contrôle négatif).  [...] Aucune bande qui pourrait montrer une certaine amplificationd'un fragment d'ADN. par contre tout en bas du gel et au niveau de tous les tubes y a une bande de la même taille et même intensité (paraît comme s'il s'agissait de fragments d'ADN dégénérés...) et qui correspond à la plus petite bande du marqueur et qui est située aussi tt en bas.  [...]