• Santé - Révélation, Coloration, Rouge, Rose

[Biochimie] Pourquoi on dose les nitrites (Griess) a 543 nm?

je n arrive pas a comprendre pourquoi la longueur d onde du Griess est de 543nm (Vert. 520-565 nm), la révélation des nitrites se fait par une coloration rouge-rose.  [...] Lorsque ta solution est éclairée par une lumière blanche, celle-ci va réfléchir l'ensemble des longueurs d'ondes, a l'exception du vert qui va être absorbe par ton colorant. Ce que tu va voir est donc la couleur complémentaire du vert, a savoir le rouge-rose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vérification transfert W.Blot

Le coomassie permet de révéler toutes les protéines que tu as déposé. C'est une méthode de révélation plus sensible que le rouge ponceau mais en revanche la coloration est irréversible et empêche de faire un immunoblot derrière.  [...] Sinon, si tu veux absolument contrôler le transfert sur ta membrane et faire un immunoblot derrière alors il faut passer au rouge ponceau dont je parlais plus haut. Le rouge ponceau est une coloration labile qui te permettra de faire ta réaction immunitaire derrière.  [...]

Révélation enzyme au ROUGE CONGO

Après avoir effectué une électrophorèse en condition native avec comme échantillon des enzymes (sur gel en polyacrylamide), j'ai effectué une révélation de ces dernières au Rouge Congo.  [...] Enfaite on utilise le rouge congo pour colorer le substrat qu'utilise notre enzyme. Là où il n'y a pas de coloration c'est l'endroit où l'enzyme a travaillé et a dégradé le substrat.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Après la migration, je fais un transfert et je vérifie ensuite par du rouge ponceau la qualité de la migration et du transfert. Ensuite je fais une marquage anticorps. Le problème est donc que je ne fais pas de photo au ponceau, je le rince direct et je sature ma membrane pour la révélation.  [...] Je commence par vérifier la qualité du transfert par une coloration rouge ponceau, et c'est là que je me rends compte de la qualité de la migration de mes protéines. Après le rouge ponceau je rince la membrane dans du PBS et je fais une immunorévélation de ma (mes) protéines d'intérêts.  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Le souci avec la congélation, c'est que lorsque vous allez décongeler votre microplaque, il y a de forte chance que votre anticorps coaté soit dénaturé ou fortement détérioré.   [...] On peut voir que la réaction s'opère tout de même, mais très lentement et très faiblement. la révélation prend normalement 15mn, et là on commence à apercevoir une coloration à partir de 45mn. La coloration des positifs reste très faible (environ 0.01 au lecteur de plaques), alors qu'elle devrait atteindre environ 0.1.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème Western Blot

Lors de ma migration, le front de migration fait comme une vague au milieu du gel, problème de polymerisation Tampon pas assez mélangé.   [...] Après migration (celle-ci droite)et révélation avec un rouge ponceau, j'observe que mes bandes à faible poids moléculaire font des vagues ou smiley pas contents. Bref c'est moche.  [...]

Immunologie

J'ai fais de la coloration immunohistochimique indirecte et je n'arrive pas à comprendre le principe de la révélation au DAB. Je sais que le colorant brun se produit après la réaction du DAB avec la peroxydase qui se situe sur l'anticorps secondaire mais ce n'est vraiment pas clair pour moi.  [...] En fait dans la réalité la plupart du temps l'anticorps secondaire est couplé à la biotine et on ajoute par dessus la peroxydase couplée à la streptavidine (la biotine et la streptavidine ont une très forte affinité). Cela permet d'amplifier le signal (plusieurs enzymes par anticorps) et avoir le choix de la technologie de révélation (En changeant la streptavidine mais en utilisant le même secondaire). Pour votre culture personnelle.  [...]

problème de visualisation sur gel agarose

J'ai compris merci j'ai néanmoins une autre petite question. pour rendre les bandes fluorescentes, il faut reprendre le gel et le colorer avec un colorant qui s'intercalle entre les paires d'ADN. ça veut dire que dans le gel, les fragments sont callés dans les mailles du gel.  [...] Les fragments sont de tout façon à l'intérieur du gel, le colorant va donc pouvoir s'intercaler dedans et une révélation aux UV sera alors possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'électrophorèse disparaissant ...

2// Un halo de fluorescence apparait autour des colorants du tampon de charge. On a eu le problème avec le Orange G contenu ds le tampon de Promega, avec la formation d'un halo bleu ciel assez intense qui masquait les bandes. J'ai donc refait un tampon de charge contenant uniquement du bleu de bromophenol, et là pareil, en moins intense.  [...] Pr l'histoire de halo. en fait, on utilise un tampon de charge qui contient trois colorants. xylene cyanol, bleu de bromophenol et orange G (Promega), les trois migrants environ à 4000, 300 et 50pb environ, respectivement. Quand on révèle sous UV, les taches correspondant aux colorants sur le gel sont sombres et ne genent en général pas la révélation, elles masquent légèrement ms rien de grave.  [...]

[Biochimie] Problème de révélation des mbnes de nitrocellulose : bandes non spécifiques claires sur fond foncé

La révélation des membranes de nitrocellulose par chimiluminescence (kit ECL) montre toutes les bandes de l'extrait protéiques blanches sur un fond gris foncé (qui se fonce au fur et à mesure du temps de l'exposition dans l'appareil). Autrement dit la révélation a donné une sorte de ponceau blanc.  [...] Excusez moi est ce que vous vous rappelez si ce problème est parti en changeant d'anticorps ou de la dilution anticorps/anti-anticorps ou un autre paramètre.   [...]