• Santé - Restriction, Enzyme, Promoteur

[Biochimie] nucléase

Tu commences par ouvrir ton plasmide avec une enzyme de restriction, tu fais agir ta phosphatase, et tu peux ensuite tranquillement faire ta réaction de ligation entre ton transgène et le plasmide (et ainsi éviter que ton plasmide ne se referme sur lui-même et d'avoir bossé pour rien).  [...] Admettons voilà ton plasmide ouvert par deux enzymes différentes, une bleue une violette. -PROMOTEUR- site Enzyme de restriction 1 (du vide) site Enzyme de restriction 2 - TERMINATEUR-et on rejoint le promoteur puisque le plasmide est circulaire.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

1/Insertion du GAL4 avec un promoteur GMR en amont de ce gène dans l'élément P à l'aide d'enzyme de restriction pour retirer le gène dont le produit conduit à la transposase (enzyme). on obtient donc un élément P modifié.  [...] 5/Insertion de LacZ avec un promoteur UAS en amont de ce gène dans l'élément P à l'aide d'enzyme de restriction pour retirer le gène dont le produit conduit à la transposase (enzyme). on obtient donc un élément P modifié.  [...]

[Biotechnologie] Vecteur d'expression.

un vecteur d'expression comportant 2 régions régulatrices, un promoteur P (200b) et une région amplificatrice E1 (600b) issues de 2 gènes différents. Les extrémités 5' et 3' de P et E1 sont franches et ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction.  [...] Sachant que les extrémités ne peuvent pas être coupées par une enzyme de restriction, l'intégration du gène se fera par recombinaison.  [...]

enzyme de restriction Hin1II

je suis une étudiante en première année de thèse et j'ai un problème avec la détection d'un polymorphisme au niveau du promoteur IGF1 rs35767 par RFLP. j'ai utilisé l'enzyme de restriction Hin1II ou appelé aussi NLaIII mais j'ai eu une digestion dans tous les individus que j'ai testé alors que la mutation est rare dans la population caucasienne et elle est seulement de 10%.  [...] Je ne connais pas particulièrement cette enzyme, mais en pêchant des infos sur le site NEB, il semblerait qu'elle ne soit pas stable. Ceci explique peut être votre problème avec l'apparition de coupures aspécifiques. Votre lot est-il ancien.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'aimerais savoir où trouver la séquence du promoteur de ce gène. C'est pour savoir si le site de restriction que j'ai choisi n'est pas trop pr ès du promoteur.  [...] Je dois faire une restriction avec une enzyme et il ne faudrait pas que ça me coupe le promoteur. Je dois vérifier que l'enzyme est assez en amont du promoteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

1) Enzyme de restriction spécifique à AOX1 ainsi qu'au plasmide vecteur de clonage. Donc découpage des deux au bon endroit.  [...] 2) Insertion du promoteur dans le plasmide et reapariment de base car notre enzyme de restriction est spécifique et a couper notre fragment au bon endroit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Si il n'y a pas de site de restriction utilisable encadrant ton gène, il va falloir en ajouter. On va donc ajouter 2 sites de restrictions différents de chaque côté de ton gène. Note que pour l'énoncé 1 tu peux utiliser 2 fois la même séquence de restriction car comme tu as déjà ton promoteur le sens d'insertion du gène n'a pas d'importance.  [...] Une fois ta PCR faite, tu digères tes fragments avec les 2 enzymes et pareils avec ton plasmide. Quand tu choisis tes sites il faut que tu vérifies l'ordre dans lequel les sites de restriction sont pr ésents sur le plasmide. Dans notre cas, il faut que EcoR1 soit avant HindIII et le tout après le promoteur déjà pr ésent sur le plasmide (sinon ton insertion se fera à l envers). Donc il faut que ton plasmide ait.  [...]

[Génétique] carte de restriction

j'ai un exercice dans lequel je dois faire la carte de restriction. or je n'arrive pas à comprendre comment faire car j'ai. région du promoteur du gène et la séquence du site de clonage multiple.  [...] Tu prends la séquence de clonage et tu cherches tous les sites dans ta séquence promoteur+ gene. Ensuite tu en déduis la taille de chaque fragment généré par restriction.  [...]

cre lox et recombinaison homologue

Euuuh, pour moi le système Cre/Lox servait a exprimer/inhiber un gène a un instant t déterminé par l'expérimentateur.. Le gène Cre code pour une enzyme recombinante, qui est flanqué d'un promoteur inductible (Inductible par n'importe quoi, aux choix, température, concentration de glucose, expression d'un facteur particulier...).  [...] Une fois que ce promoteur est activé, l'enzyme est synthétisée et va reconnaître les sites Lox sur le génome. Le gène a réprimer a été préalablement encadré des séquences Lox et l'enzyme Cre nouvellement exprimée va exciser la partie entre les deux sites Lox.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Je ne sais pas quel vecteur tu veux utiliser, mais il existe des centaines de vecteurs commerciaux qui comportent tout ce qu'il faut, dont un MCS ( multi cloning site ) entre le promoteur et le terminateur. Ce site contient une grande quantité de sites de restriction et permet d'insérer facilement ce que tu veux. (voir image).  [...] Ici tu peux voir entre le promoteur et le terminateur ce MCS qui contient plein de sites de restriction. Il y a aussi l'origine de réplication (ColE1), un gène de résistance à la néomycine (neoR).  [...]