• Santé - Résine, Nickel, Protéines

[Biochimie] Quelle résine Nickel pour purifier mes protéines?

[Biochimie] Quelle résine Nickel pour purifier mes protéines.  [...] Quelle résine Nickel utilisez-vous pour purifier vos protéines taggées His6.  [...]

[Biotechnologie] [sels] dans un tampon

En chromato d'affinite au metal comme cobalt ou nickel avec TAG histidine, le sel n'influe pas sur la fixation TAG. -. resine, en revanche cela permet de limiter les fixations non specifiques de tes proteines (dues au charges).  [...] Le TCEP est un agent reducteur tout comme le DTT, suivant le pH de tes tampons l'un est preferable a l'autre. Mais les deux sont la pour eviter l'oxidation de tes proteines (notamment des cysteines).  [...]

[Biochimie] Affinité de deux protéines par colonne de Nickel

depuis quelques jours j'essaye de mettre en évidence une affinité entre deux proteines, HPr et yvdi( codé chez B. subtilis) mais sur colonne Nickel agarose je décroche toujours en élution les deux proteines.  [...] Merci de mettre un titre plus explicite la prochaine fois. le nom de la manip qui pose problème est plus explicite que le nom de la protéine étudiée.  [...]

[Biochimie] Dégradation de protéines dans l'urée 8M

Je purifie ensuite mes protéines en les passant sur une colonne à nickel (mes protéines possèdent des queues polyhistidine), toutes les étapes jusqu'à l'élution se font en urée 8M.  [...] Ce protocole a fonctionné pour 2 protéines mais pour la 3eme un problème survient dans la purification. La protéine se charge correctement sur la colonne (je n'ai presque rien qui ne s'accroche pas), elle résiste aux lavages et au moment de l'élution je me retrouve avec une bande beaucoup plus basse, comme si la protéine avait été tronquée ou digérée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine étiquetée

C'est une protéine où on va lui coller une séquence Tag (exemple, l'histidine) et ça permet de savoir quel dose de protéines exogènes tu utilise dans ta culture cellulaire.  [...] Ca permet aussi de purifier la protéine. Par exemple une chromatographie d'affinité avec du nickel permettra de récupérer les protéines étiquetées avec six histidines.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Ce papier a pu faire un Science car les autres puces protéomiques n'avait pas ce nombre de protéines testées, ni cette sensibilité en 2001. De plus, cette puce permet d'observer les interactions protéine-protéine, mais également protéine-lipide (pour le transport des lysosomes, par ex), ce qui est complètement nouveau à cette échelle.  [...] Une fois les 5800 protéines purifiées (dans 5800 tubes différents, hein), 5800 dépôts sont réalisés sur un support spécial (lame recouvert de Nickel, si je me souviens bien). Et la puce est ainsi réalisée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

1) Les protéines se fixent mal aux billes de nickel donnant un rendement très faible, je retrouve la majorité de la protéine dans le surnageant, malgré 4 heures d'incubation. Il est possible qu'elles aient perdu leur Tag, je vais vérifier avec un anticorps cet après midi, mais si tel est le cas à quoi cela peut-il être du.  [...] En effet, les histidines fixent moins bien le cobalt que le nickel, et donc seules les protéines qui ont beaucoup d'histidines (comme une prot avec un 6His ) se fixeront. L'utilisation du cobalt augmente donc bien la spécificité.  [...]

[Biologie Moléculaire] His-tagged protein ?

Pouvez-vous s'il-vous-plaît m'indiquer en quoi consiste la méthode de marquage de protéines avec une chaîne d'histidine.  [...] On ajoute 6 histidine en début ou en fin de protéines. Ces molécules ont une grande affinité pour le cobalt ou le nickel. Ca simplifie les protocoles de purification en ce sens que l'on est plus obligé d'utiliser un protocole spécifique de la protéine d'intérêt.  [...]

ubiquitine et protéasome

Personellement j'utilise un système de purification sur Nickel. Je transfecte les cellules avec l'ubiquitine taggée (car voir une ubiquitination sans transfecter l'Ubi est impossible pour la plupart des protéines). Si la protéine est connue pour être dégradée par le protéasome, il faut bien entendu ajouter un bloqueur pour la visualiser.  [...] Ca ne te donnera pas d'info car il y a un très grand nombre d eprotéines ubiquitinées. ce n'est pas spécifique de la protéine que tu étudies.  [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

Est-ce qu'il peut y avoir plusieurs protéines de (par exemple) 100 kDa Et si non, quel est le pouvoir de résolution de cette technique.  [...] En fait, j'ai jamais bien compris l'utilité de cette expérience (Coomassie). Quand il manque des bandes dans certains puits, c'est nickel. Mais souvent on n'est pas très sur qu'elles manquent vraiment... Ou alors on n'est pas sur d'avoir la même quantité de protéines dans tous les puits.  [...]