• Santé - Réponse, Plasmide, Cellules

[Divers] Interprétation d'un article: question sur les cellules HEK293

Or ici, c'est justement le cas, puisqu'ils transfectent les HEK293 avec des plasmides exprimant le TLR2 et CEACAM1, dont la fixation avec des molécules bactériennes inhibe la réponse inflammatoire et immunitaire.  [...] Si on ne transfecte pas les cellules elles ne répondent pas. Si on transfecte avec un plasmide d'expression TLR2, elles répondent. C'est bien la preuve que c'est TLR2 qui médie la réponse. De plus, si il avait déjà été présent dans les cellules alors les cellules non transfectées auraient répondues.  [...]

lignée cellulaire

Merci bcp pour ta réponse mais au fait dans le abo on les a utilisées pour tester des nucléases dans un plasmide par transfection avant de le faire sur des cellules humaines juste pour les tester car on sait que les cellules 293 sont des cellules ou la tranfection marche trés bien, donc moi ce que je veux c'est l'origine de ces cellules pour pouvoir mettre ça dans mon compte rendu.  [...] Un rapide coup de google, cette lignée 293 correspond en fait aux cellules HEK. Quelques liens (en anglais, pas de wiki francais pour cette lignée).  [...]

[Biochimie] Interpretation d'un schéma !

ça concerne la vaccination par ADN et son pouvoir à induire à la fois la réponse humorale et cellulaire. et aussi, ce sont les cellules musculaires (en marron) et les CPA qui captent le plasmide.  [...] - D'aprés le schéma, les cellules musculaires présentent et appretent la protéine...comment est ce possible ce ne sont pas des CPA à ce que je sache.  [...]

[Biologie Moléculaire] Proteines recombinantes

Dans un premier temps E.coli va croître dans un milieu sans lactose et en présence d'ampicilline. Cela permet d'éliminer les bactéries n'ayant pas intégré le plasmide recombinant (et donc le gène de résistance) et d'obtenir les bactéries d'intérêt, sans transcrire la beta-galactosidase et la chaine d'insuline.  [...] Les protéines n'ayant pas intégré le plasmide vont donc crever, on ne fait rien avec. Pourquoi toutes les bactéries n'intègrent pas le plasmide Pas vraiment de réponse, ça dépend de beaucoup de choses, c'est un peu comme les transfections pour les cellules eucaryote, tu n'as jamais 100% d'intégration et tu dois valider tes transfections.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Je n'ai jamais produit de proteine de fusion. J'avais besoin d'une construction et au lieu de recevoir un simple plasmide, j'ai recu une construction dans un pGEX. Je suppose que c'est pour produire ma prot en fusion avec les GST.  [...] Y-a-t-il un moyen que je transfecte ca dans des cellules eucaryotyes Je pense que je connais la reponse mais je tente... Ou bien il me faudra sous-cloner ma sequence dans un autre plasmide genre pcDNA3 classique par exemple, n'est-ce pas (si j'arrive a connaitre les enzymes de restriction pour ce faire...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

Pensez-vous qu'il soit possible d'isoler et purifier un plasmide (EBV = pas d'intégration et expression à long terme sous sélection) à partir de mes lignées cellulaires transfectées.  [...] Essayes de faire une miniprep sur tes cellules, comme on le fait pour les bactéries. Le problème est que les tampons risquent de ne pas être adapté pour cette situation et rien donner comme production. Je ne vois que cette solution en tout cas car les extractions d'ADN classique ne séparerons pas le plasmide de l'ADN génomique alors que les kit mini-, midi- et maxiprep le permettent...pour les bactéries.  [...]

[Biologie Cellulaire] Plasmide eucaryote/bactérien dans une lignée cellulaire

Dans ta population de cellules après transfo seulement une partie a pris le plasmide. Si tu n'as pas de marqueur sur ce plasmide pour le sélectionner tu ne sauras pas si ta transfo a marché mal/bien/très bien et donc l'efficacité de ta transfo.  [...] J'utilise des HEK-293 et mes conditions de transformations pour cette souche sont optimales (~ 90% de cellules transformées). J'ai déjà transformée cette lignée avec d'autres plasmides qui ont bien exprimés leur gène donc je doute que ça soit la transformation qui pose problème.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transfection et nombre d'intégration

Voilà je me pose la question suivante. je sais que cela dépend de la méthode de transfection, de la lignée cellulaire et du plasmide, mais prenons des éléments courants. une lignée HeLa, transfection lipofectamine, avez-vous une idée après sélection antibiotique du nombre de copies plasmidiques qui s'intègrent en moyenne dans le génome d'une cellule.  [...] Une deuxième question liée à la première. pour établir une lignée stable, compte-tenu du fait que l'on sélectionne un évènement rare, la méthode la plus pratiquée est-elle la sélection et amplification puis vérification individuelle de clones (c'est ce qui me semble le plus approprié) ou bien des gens poolent -ils leur cellules après sélection bien que celles-ci puissent avoir perdu le gène d'expression ou en posséder différents nombres de copies.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires.  [...] J'imagine donc, que le plasmide est considéré comme matériel viral et qu'il subira l'encapsidation avant de transfecter dautres cellules.  [...]

[Génétique] Help! tp génétique, analyse clonage

Ensuite on a aussi fait un test de compétence avec encore une suspension de cellules compétentes à laquelle on ajoute du plasmide pur. Le tout est ensemencé sur une boite de Lb agar.  [...] Ce que tu fais c'est que tu transformes tes colonies avec le plasmide natif (= non recombinant = sans insert). Tu veux vérifier que les cellules l'ont bien intégré donc tu les étales sur une boîte contenant du LB agar et... (un antibiotique, non ).  [...]