• Santé - Rendements, Méthode, Extraction

[Biologie Moléculaire] Concentration dosage ARN

edit. sinon pour vérifier si mes ARN ne sont pas trop dégradé, j'envisage de faire un gel non-dénaturant. Hormis des précautions style ARN dans la glace/port des gants/etc... des avis sur cette méthode.  [...] Ca me parait juste énorme d'avoir de telles concentrations grâce à un kit commercial. J'avais des rendements dans ces eaux là mais par la bonne vieille méthode de l'extraction au phénol, mes rendements par kit étaient beaucoup moins importants.  [...]

[Biologie Moléculaire] nombre de cellules

Bonjour à tous, je voudrais savoir combien d'ARN et donc combien de cellules environ (combien d'ARN contient une cellule) est nécessaire pour une manip de PCR quantitative, merci de vos réponses.   [...] Les rendements en ARN totaux après extraction sont très variables selon le matériel envisagé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ARN+ RT-PCR

J'utilise le kit RNA miniprep de stratagen. Il est tres bien et tres rapide. Par contre pour la RT-PCR je remplace le traitement a la DNase du kit par un traitement a la turbo DNA free d'AMBION (apres inactivation de l'enzyme via le kit ambion, je recupere le protocole stratagen).   [...] Les rendements sont tres bons et la purete parfaite (pour de l'extraction de l'ARN bacterien).  [...]

[Biologie Moléculaire] culture bacterienne agrégée ?

lors de l'extraction de plasmide. En effet, en realisant une miniprep j'obtient des rendements tres faibles 50ng/uL contre 220ng/uL habituellement.  [...] Je remarque que lors de la culture, les bacteries forment un culot au fond du tube alors que je travaille dans les meme condition qu'habituellement 5ml en falcon et aerobie.   [...]

[Biotechnologie] Fragilisation d'une paroi de champignon

j'essaie d'extraire l'ADN des spores de ma petite bete mais rien y fait donc s'il y a des gens qui pourrait me donner des pistes plutot enzymatiques pour fragiliser voir détruire la paroi d'une spore de champignons je suis préneuse.   [...] J'ai travaillé sur des Penicillium il y a quelques années de cela et on utilisait un kit d'extraction d'ADN fongique de chez... Sigma je crois. Mais bon, les rendements avaient l'air ridicule, vous aurez peut être besoin d'optimiser le protocole suivant la paroi de vos spores. Faudrait que je déterre mon rapport.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quel Kit d'Extraction des RNA Totaux ?

Ben moi je travaille pas du tout sur ce genre de matériel, mais j'utilise les kits d'extraction d'ARN de chez Qiagen surtout le micro car j'ai des petits échantillons, et le mini aussi et j'ai de très bon rendements.  [...] Ce sont des extractions sur colonne qui sortent effectivement de bons rendements et des échantillons relativement peu contaminés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN de plantes

Je vais tester dans mon laboratoire une nouvelle méthode d'extraction d'ARN à partir de graminées (poacées pour les gens modernes), en utilisant du Ribozol™ (AMRESCO).  [...] Je te conseille systématiquement de passer par des kit adaptés aux plantes ou des protocoles modifiés. Tu peux risquer bien entendu mais le problème est que la concentration en sucre des échantillons est très importante et parasite les réactions, généralement c'est la cause de mauvais rendements.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN foie

J'ai extraits quelques fois de l'ARN du foie grâce au trizol. Ca ne pose aucun problème, Les rendements sont très bons. Il ne faut pas s'inquiéter de la couleur très rouge/brun dans le trizol, c'est juste dû à la présence de sang. Les choses se normalisent après l'extraction par le chloroforme.  [...] depuis un an j'ai du extraire un bon milliers d'échantillons de foie ou d'hépatocytes, en colonnes et en trizol. Conclusion. c'est pas dur a lyser, bon rendement effectivement et surtout quasiment pas de dégradation (et je passe mes ARN au bain marie a 65°. ).  [...]

[Microbiologie] Technique de prélèvement !!

Je veux faire ce prélèvement avec la technique d'écouvillonnage. mais en plus de cette technique, je cherche une autre pour augmenter mes chances de trouver plusieurs bactéries.   [...] Ensuite tout dépend des conditions dans lesquelles tu souhaites faire tes prélèvements. parce que çà peut aussi bien être des boîtes contact comme évoquées par Gael que la méthode par ultra-sons (qui donne de bons rendements de récupération mais est moins pratique à mettre en place.).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

J'utilise la méthode au Trizol / chloroforme et souhaite augmenter mon rendement en utilisant un carrier tel que le glycogène. L'avez vous essayé et avez vous eu de meilleurs rendements D'autre part, l'incubation avec le Trizol et le chloroforme se fait soit à 4°C 5 et 2 min respectivement soit à RT 15 et 3 min r.  [...] Salut. j'utilise habituelement l'extraction phenol/chlorophorme et glycogene pour extraire les arn des mes cultures cellulaires.. et le rendement est amliore, pas de facon faramiseuse, mais il y a une difference qui justifie l'achat.  [...]