• Santé - Rencontre, Problèmes, Western

[Biologie Moléculaire] Problème Western Blot

Lors de ma migration, le front de migration fait comme une vague au milieu du gel, problème de polymerisation Tampon pas assez mélangé.  [...] Si quelqu'un a déjà eu ce problème et peut me donner des explications plus avancé que changer toutes les sauces je suis preneur.  [...]

[Biochimie] Pb échantillon gel Tris-Tricine

Je travaille sur un peptide inférieur à 3 KDa et je voulais le visualiser en western blot. Mais je rencontre un petit problème. lors de la migration en gel tris-tricine, mes échantillons se reserrent )( dans mon gel de séparation. Pb de sels Mes échantillons sont préparés avec des cellules fraîches et broyées directement dans le tampon d'échantillon.  [...] Il y a peut être un problème avec l'acrylamide mais ca fait deux fois qu'on obtient le même résultat snif... Pour ce qui est du gel de stacking et du gel de concentration, on les coule successivement et en se réferant au protocole donc pas de pb de ce côté là.  [...]

densité optique

Je m'adresse tout particulièrement à ceux qui ont l'habitude de mesurer les densités optiques des taches de leur western blot avec des logiciels sur PC.  [...] Quelqu'un a-t-il déjà rencontré le problème comment vous y prenez vous pour déterminer la densité optique d'une tache sur un film de western.  [...]

[Biologie Moléculaire] Anticorps GLUT2 pour Western Blot

J'aimerais avoir votre avis sur un petit problème que je rencontre actuellement au laboratoire. Voila je fais des Western Blot depuis un bon moment mais impossible de trouver un anticorps GLUT2 assez potable. En effet beaucoup me donne des bandes non spécifiques.  [...] les GLUT sont difficiles à sortir en WB, pour ma part j'ai laissé tomber. Il existe un protocole spécifique où la dénaturation des protéines se fait en présence d'urée, vous devriez essayer cela.   [...]

Problème de WB, HRP sensible à la lumière ?

Quels problèmes rencontres-tu avec tes western Est-ce une mise au point ou une technique qui a déjà fonctionné et qui d'un seul coup se met à donner des choses bizarres.  [...] Commence par réutiliser des boîtes, ça te permettra de savoir si les problèmes sont dus aux tubes falcon, et remets en question tout ce qui a pu changer dans ta technique depuis que les westerns ne fonctionnent plus bien.  [...]

[Biochimie] électrophorèse SDS PAGE

avec ces conditions j'ai obtenu des résultats parfaitement clairs ms dernièrement j'avais un problème au niveau du courant.  [...] Je fais la migration en volt fixé. Normalement je le fixe à 120V, parfois le courant reste fixé à 120v et le générateur affiche une tension de 50mA, dans ce cas j'obtiens de bons résultats et j'ai une très bonne séparation. Mais le problème qui se pose c'est que parfois le courant s'arrête à 60V et 70mA et dans ce cas j'obtiens une mauvaise séparation et la migration s'arrête au milieu du gel.  [...]

[Biochimie] Problème de migration de gel

Merci du conseil. Je fais des gels 15%, 7,5 cm également, et le western blot en SDS-PAGE est une technique que j'utilise tous les jours. je n'ai jamais eu de problèmes, mes collègues non plus.  [...] Par contre j'accumule peut-être les problèmes. qualité des produits, qualité de l'eau, nature des échantillons... mais je ne sais plus où donner de la tête.  [...]

[Biochimie] Western blot en pointillés

La technique du Western Blot est sans aucun doute la plus complexe que je connaisse. Bien souvent trop prise à la légère, c'est en ayant de sérieux problèmes qu'on appréhende toute sa complexité.  [...] Le gel moins dense peut avoir un effet soit sur la migration, soit sur le transfert, ou les deux bien sûr (qui a dit que le transfert était à exclure des causes possibles du problème ). Les interactions de la protéine avec le polyacrylamide ne sont pas à exclure non plus.  [...]

Purification et extraction des protéines....

je pensais donc faire au prealable un choc osmotique pour recuperer la protéine et ensuite faire un Western Blot, c'est la ou commence mes problèmes car je n'arrive pas a trouver un protocole plutot simple de WB, donc si quelqu'un peut m'aider ca serait gentil.  [...] non il n'y a pas de promoteur inductible dessus, juste une queue polyhistine rajoutée pour permettre la purification avec la colonne surement, j'ai regler mon probleme de Western blot mais on me demande d'obtenir un rendement de purification, et c'est la ou je ne sais pas trop comment faire, je penser faire un bradford et un kalckar et faire un rapport des 2 pour le rendements, je suis un peu perdu, ensuite pour la caracterisation des S-S je fais une réaction avec de l'insuline et du DTT.  [...]

[Biologie Cellulaire] Besoin d'aide dans l'identification d'une molécule !

Je cherche un résoudre un problème à partir des résultats d'un western blot. J'aurais bien aimé vous scanner ça mais j'ai des petits problèmes techniques donc je vais vous le décrire.  [...] Mais il y a un gros problème. puisque l'anticorps secondaire tout seul pèse 100kDa, il ne peut pas se trouver avec ou sans une autre protéine à 50kDa.  [...]