• Santé - Question, Technique, Protéines

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

J'utilise la technique du western blot afin de quantifier mes protéines d'intérêt (par chemiluminescence, révélation par l'ECL+ et analyseur d'image permettant de quantifier mes blots), mais une question se pose à moi. pourquoi dit-on du western blot que c'est une technique semi-quantitative Quelles sont les limites de la quantification.  [...] Elle serait quantitative si vous déposiez une gamme de concentration de la protéine que vous souhaitez quantifier. En général ce que l'on fait c'est que l'on utilise une protéine standard (l'actine) et on dilue les échantillons pour avoir la même quantité dans tous les puits.  [...]

[Biochimie] Structure des protéines : diffraction aux RX et carte de densité électronique

J'ai un question à poser dns le domaine de l'étude de la structure des protéines. j'ai moyennement saisi le principe de la cristallographie suivie de la diffraction aux Rayons X de cristaux de protéines. À l'issu de cette dernière technique, on est censé obtenir une carte de densité électronique ou l'on peut voir plusieurs tâches obtenus grâce aux RX diffractés.  [...] On obtient d'abord des clichés de diffraction pour différentes orientations du cristal dans le faisceau de rayons X. On mesure l'intensité des tâches de diffractions pour chaque image et on les combinent. Puis, à partir des intensités mesurées et des phases (expérimentales ou issues d'un modèle moléculaire proche) on peut calculer la carte 3D de densité électronique par une transformée de Fourier inverse.   [...]

[Biologie Moléculaire] Co-immunoprecipitation

Comme le titre l'indique je souhaiterai réaliser une c-immunoprécipitation afin de montrer l'interaction de deux protéines in-vitro. N'ayant absolument jamais réaliser ce type d'expérience, je souhaiterai savoir si cela est compliqué Ensuite, j'ai une question technique.  [...] lors de la précipitation de notre protéine cible avec un anticorps, faut il auparavant fixer notre protéine avec les autres protéines qui interagissent avec (je me dis que sans cela les interactions sont peut être trop faible pour permettre de visualiser sur western blot).  [...]

Lutte contre le paludisme : une nouvelle piste grâce à l'imagerie 3D

Pour cela, ils ont tenté de cristalliser l' enzyme en question pour ensuite en déduire sa structure tridimensionnelle, mais la technique est assez complexe. La cristallisation consiste en la déshydratation d'une gouttelette composée de protéines purifiées pour que ces protéines finissent petit à petit par s'agglomérer entre elles.  [...] Une fois les protéines cristallisées, les chercheurs ont utilisé la technique de cristallographie par rayons X pour visualiser la structure tridimensionnelle de l'édifice. Il s'agit de calculer la position des atomes dans l'espace par la réflexion des rayons sur les électrons.  [...]

[Biologie Cellulaire] Validation analyse transcriptomique

à la suite d'une analyse transcriptomique, pourquoi est-il nécessaire de la valider, par exemple en effectuant une cytométrie à flux.   [...] Une analyse transcriptomique ne renseigne que sur l'expression transcriptionnelle du génome. Les fonctions sont établies par les protéines (or cas des miRNA bien sûr), par conséquent si on veut faire un lien entre un transcriptome et une fonction ou un phénotype, il est mieux de faire une analyse plus poussée avec de la cytométrie de flux, du western blot, ou tout autre technique permettant de finaliser la réponse à la question initiale.  [...]

Technique du Double Hybride

Je voudrais me renseigner sur la technique du double hybride. Je connais le principe général et son utilité pour connaître le lien et les interactions entre une protéine connue et des protéines inconnues, mais ce que je voudrais en fait ce sont des protocoles et des informations précises et concrètes sur l'utilisation de cette technique.  [...] Encore une petite question si vous avez utilisé cette technique. moi je suis passionné par tout ce qui est induction du signal, prot G, etc... et donc cette technique m'est apparu comme la baguette magique... Parce que ça veut dire que, en théorie, cette technique est capable de mettre en évidence des liens fonctionnels entre différentes protéines et donc la découverte des voies de signalisation cellulaire parait donc beaucoup plus aisée et rapide. (ma question arrive.  [...]

[Immunologie] Technique des tétramères

Pour répondre à ta deuxième question tu parles sans doute des CBA c'est une technique qui permet en effet de doser des cytokines mais aussi d'autres protéines.  [...] Pour la technique des Tétras cela permet de voir si nous avons une population de LT spécifique du complexe Tétra/peptide qui est activé, si il y a une expansion clonal.  [...]

Les bases constituant les protéines

J'ai une question d'ordre plutôt technique (appliqué à la biologie) par rapport aux protéines. En effet, j'aimerai savoir par quels moyen peut-on, comme pour l'ADN, déterminé les suites de bases (A,T,C,G) qui font 1 peptides. C'est-à-dire, en gros, par quels moyens reconnait-on tel ou tel acide aminé ainsi que leur enchainement le long des différentes chaines peptidiques.  [...] On est obliger de passer par une digestion trypsique.. A moin d'etudier une protéine vraiment petite. Et les technique de MS2 sont utilisée pour différencier Leu et Ile par exemple, l'enchainement primaire etant accessible en MS.  [...]

[Biochimie] Diverse question

Proposer une technique permettant de déterminer la masse molaire d'une protéine hétérodimérique.Justifier. aucune idée.  [...] ensuite pour la question Proposer une technique permettant de déterminer la masse molaire d'une protéine hétérodimérique.Justifier la question est donné tel quel sans infos complémentaires.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

l'immunoblotting est juste une des techniques utilisées pour arriver à ces conclusions (par visualisation de l'intensité sur SDS PAGE ), donc à priori je ne vois pas le lien avec une protéine endogène.  [...] d' ou ma question. connais tu une technique pour vérifier que la cysteine est bien proche du site actif, sachant qu on connait La séquence de la protéine mais pas sa structure 3D.  [...]