• Santé - Quantité, Protéine, Intérêt

[biochimie] activité spécifique/activité totale

Bonjour, c'est la première fois que je me sers de ce forum et je ne comprend absolument pas comment créer ma propre question ^^.   [...] Dans mon cours il est dit que l'activité totale évalue la quantité de protéine d'intérêt dans le milieu et que l'activité spécifique évalue la quantité relative de protéine d'intérêt dans le milieu.  [...]

Antigène

Les protéines recombinantes ne sont donc pas extraite de la nature mais synthétisées en laboratoire. Pour te donner un exemple que j'ai expérimenté, moi en thèse je travaillais sur la protéine d'un parasite très pénible à cultiver. J'aurais jamais pu cultiver assez de parasites pour ensuite faire 50 étapes d'extraction/purification pour arriver à un excellent taux en ma protéine d'intérêt dans mon échantillon, et en quantités acceptables pour mes manips.  [...] Du coup, j'ai fait exprimer ma protéine d'intérêt à une bactérie (E. coli). elle se cultive très facilement et je peux lui faire produire ma protéine en très grande quantité. C'est ce qu'on appelle le clonage moléculaire. Grâce à la transgenèse. Après expression de la protéine, je dois la purifier pour me débarrasser de tout ce qui appartient à la bactérie et me retrouver avec un taux idéalement avoisinant 100% de ma protéine d'intérêt.  [...]

enrichissement de fractions

A mesure que l'on purifie, la concentration du produit d'intérêt devrait augmenter. En enzymologie, une méthode pour suivre cela est de suivre l'activité enzymatique (en gros la quantité de substrat consommé [ou de réactif formé]/unité de temps/quantité de protéine [ou volume]).  [...] En général, on dose les protéines et on fait une réaction enzymatique. On a donc le volume, la quantité de protéine et l'activité enzymatique (Unité enzymatique).  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

C'est justement la puissance de la spectrometrie de masse, c'est que tu n'as pas besoin d'une grosse quantite de proteine pour voir quelque chose. Si tu as un moyen d'enrichir ta proteine (surexpression ou endogene) par IP par exemple, c'est generalement suffisant (ca te permet aussi de determiner si des proteines interagissent avec ta proteine d'interet.  [...] Ce qui me fait dire que la proteine est phosphorylee est que le 2 amino-purine (un inhibiteur de kinase) affecte fortement la reaction dans laquelle cette proteine interviens. Maintenant il n'est pas imppossible que ca soit un effet plus indirect, mais je tente le coup.  [...]

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot

Et bien tu utilises un anticorps dirigée contre ta protéine de normalisation comme l'actine, la tubuline, le GAPDH... pour révéler sur la même membrane où tu as révélé ta protéine d'interêt. Si tu as déposé la même quantité de protéine dans les puits, ta protéine contrôle va te permettre de le confirmer visuellement.  [...] Même si le western n'est pas une méthode quantitative il est aussi possible de mesurer l'intensité de tes bandes avec un logiciel, et de normaliser ta prot d'interêt par rapport à ta protéine contrôle mais en général on se contente du visuel.  [...]

[Biochimie] Rendement et facteur de purification

si tu veux, l'activité spécifique désignant la quantité d'enzyme quil faut pour une activité totale tant, en la purifiant, tu enleves les résidus pesant dans la protéine, donc je suppose que en purifiant, tu as augmenté son activité spécifique, donc le facteur de purification désigne le gain que tu as eu en efficacité.  [...] Normalement, il y a notre protéine d'intéret A + pleins d'autres protéines dans l'extrait initial. On a donc une activité totale x dans cet extrait qui est proportionnelle à la quantité de A dans l'extrait.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

Si ta production n'est pas très grande, attention toutefois à la quantité de billes nécessaire, car plus il y a de billes, plus tu augmentes la possibilité d'intéractions aspécifiques avec les billes. Ta protéine est elle soluble Car il se peut aussi qu'elle soit produite en grande quantité, mais non solubilisée dans le tampon d'extraction.  [...] La quantité nécessaire dépend de plein de paramètres, dont le poids moléculaire de la protéine d'intérêt (plus son PM est petit, moins il y a en besoin, car plus il y a de mole/µg), la force d'intéraction avec le partenaire, du type de détection (western blot, autoradiographie).  [...]

Help: rôle des protéines!

Le seul interêt des proteines alimentaires est de fournir les acides aminés. Les acides aminés sont les unités de base qui composent la proteine, il en existe 20. Parmis ceux-là 8 sont indispensables chez l'homme car ils ne sont pas synthétisable 'de novo en quantité'.  [...] tout ce que l'on consomme passe par le tube digestif où c'est digéré par des enzymes. Les protéines sont entièrement dégradées en acides aminés qui serviront à nos cellules pour fabriquer nos propres protéines (grâce au code génétique). un peu comme un enfant qui démonte une voiture en lego pour fabriquer une maison.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

.. J'ai décidé de rester chez coli parce que les essais préliminaires d'expression de cette protéine mais avec un tag MBP (j'utilise hexa-His) ont été concluants.  [...] Quoi qu'il en soit, je vais lire les manuels d'utilisation ce soir et commander un kit baculo demain... J'en ai trouvé d'autres qui produisent de la protéine en 6h, en free-cell, mais la quantité est largement insuffisante pour ce que je veux faire, du coup, l'intérêt que la produise dans un tel système est limité.  [...]

[Immunologie] Immunoprecpitation: liaison de la resine protG avec l'anticorps qui marche pas

Bonjour tous le monde. Je suis entrain de faire la mise au point d'une IP. pour se faire j'ai voulu juste tester le rendement de la résine protG avec l'anticorps sans rajouter la protéine d'intérêt. la résine ne capte même pas le 1/10 de la quantité de l'anticorps de départ qui est de 1µg dans 500µl de PBS avec 50µl de la résine.  [...] Je laisse la résine en contacte avec l'anticorps toute la nuit puis après je lave 3 fois avec du PBS et j'élue finalement dans 50µl de glycine 2.5.   [...]