• Santé - Quantité, Enzymes, Fragment, ADN

[Biologie Moléculaire] unité taq DNA pol

La definition de l'unité enzymatique des Taq polymérases varient légèrement d'un fabriquant à l'autre. Mais en gros, on peut dire qu'une unité correspond à la quantité d'enzymes permettant l'incorporation de 10-15nmol de dNTP dans un fragment d'ADN en 30 minutes et à 75°C.  [...] Pour les enzymes on utilise même des P10 et des P2 qui descendent a 0,2µL avec précision, la P20 ne permet pas par exemple d'ajouter 0,5µL de Taq dans un tube. Je vous donne la définition d'une unité chez invitrogen. One unit incorporates 10 nmol of deoxyribonucleotide into acid precipitable material in 30' at 74°C.  [...]

PCR et vecteur de clonage

La PCR permets d'amplifier un fragment d'ADN. ceci permet principalement d'obtenir une quantité de ce fragment suffisante pour etre travaillable/analysable.  [...] L'insert, s'il est présent, va être multiplié mais on en a pas l'utilité vu que les bactéries ont déjà du faire ce travail Ne serait-il pas plus simple de digérer le plasmide dans les enzymes de restriction spécifiques de l'insert, et de vérifier si l'insert est présent en faisant une électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN.  [...] Ce que je veux dire c'est que je ne comprends pas pourquoi ces enzymes ne s'attaquent qu'à des sites de cette forme et non pas à d'autres sites.  [...]

[Biotechnologie] Construction plasmidique

Premièrement je digère un fragment d'ADN génomique avec les enzymes de restriction afin de récupérer le gène à intégrer.  [...] Tu récupère ton gène à intégrer dans ton plasmide en l'amplifiant par PCR, c'est ensuite que tu digére t'es amplifiants en utilisant les mêmes enzymes de restriction que tu utilise pour digérer ton plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage

J'essaie en vain de cloner en quantité suffisante un fragment ADN pour mon stage de M2. Le soucis est que lors de mon clonage (préculture et culture), la DO est bonne mais quand on dose la quantité d'ADN plasmidique, elle est très faible et très variable (de 10 à 300 ng/µL).  [...] Si ta DO est correcte et que tu n'as pas de contaminations il faudrait peut être deja voir comment améliorer l'extraction En général dans les kits tu peux modifier les volumes selon si tu es en high copy ou low copy... J'essaierais avec les conditions de low copy.   [...]

[Génétique] Inconvénient de la PCR

Les contaminations arrivent vite, car une très petite quantité va être amplifiée en même temps que le fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Pour éviter ça en labo, on utilise des pipettes différentes pour pipeter les ADN (qu'on ajoute en dernier dans le mix de PCR) et les solutions stock. On utilise également des cônes avec filtre.  [...]

applications de la PCR

La detection de fragments d'ADN par PCR est certes tres utile et novateur (enfin 20 ans quand meme) mais ne represente qu'une infime partie de ce que cette technique permet.  [...] Mais en provoquer, non je ne vois pas. Etant donné que la PCR sert à amplifier un fragment d'ADN, il s'agit simplement d'obtenir à la fin une quantité beaucoup plus grande de l'ADN initial, donc par définition (et en dehors des amplifications parasites et des contaminations), on aura exactement le même ADN qu'au départ.  [...]

[Biologie Moléculaire] distribution de la taille de fragment d'ADN pour un échantillon de petite quantité

Oui effectivement le Tm est un indicateur de la taille. Mais mon soucis est que je vais me retrouver avec une population comprenant des tailles de fragments différentes. Et ce que je recherche c'est d'identifier la taille de chacun des fragments, mais également la proportion de chaque groupe de fragment.  [...] Je réaliserai une PCR avec des amorces aléatoires courtes pour pouvoir amplifier tous tes fragments et ensuite faire une électrophorèse puis mesurer la fluorescence du BET pour chaque bande.  [...]

sonde chaude et electrophorèse

Alors je vais pas dire gd chose de peur de dire des betises, mais l'electrophorèse ça consiste à faire migrer des fragments d'ADN sr un gel. Pr les résultats, en fait c'est comme si tu passais du sable dans des passoires dt la maille est de + en + petite. les + petits fragments vont le plus loin.  [...] Je pense qu'il faut aussi que tu recherches des infos sr la PCR (technique d'amplification de l'ADN) parce qu'on en fait svt avt l'électrophorèse pr avoir le fragment en quantité suffisante pour qu'il soit visible.  [...]

[Microbiologie] Pcr

Ce n'est pas faire une morale pour la faire, mais comprends que des messages comme ça sont plutôt peu appréciés et moyennement pris en compte.   [...] PCR. On cherche à amplifier des fragment d'ADN, n'est ce pas Première chose à avoir. les briques élémentaires que sont les nucléotides. Le reste je te laisse un peu chercher. Penses qu'il faut faire une réaction, donc sûrement des enzymes impliquées, des conditions à respecter pour qu'elles fonctionnent etc.  [...]