• Santé - Quantité, BSA, Eau distillée

[Biochimie] méthode de BRADFORD

Personnellement je n'ai pas non plus toujours la même DO pour la même quantité de BSA. Afin de minimiser les erreurs (sachant que comme le disait Yoyo la technique n'est pas précise) je fais une gamme à chaque mesure, et en triplicate. Ensuite je fais la moyenne de mes trois points (sauf en cas de mesure aberrante) et j'utilise cette moyenne pour tracer ma droite d'étallonage.  [...] Merci de m'avoir répondu. Mais en fait, je suis dans la zootechnie, et j'ai à determiner les concentrations en protèine d'ordre de microgramme (glandes hypopharyngiennes des abeilles) et je ne sais pas quelle concentration BSA à utiliser pour tracer ma courbe d'étallonnage autrement dit comment je dois préparer la solution mère (quantité de BSA en poudre et la quantité d'eau distillée).  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème dosage microBCA

Je souhaite réaliser un dosage de protéines sur lysat cellulaire avec la méthode microBCA. Les cellules sont lysées avec du tampon RIPA (Tris 50mM, NaCl 150mM, SDS 0.1%, Sodium deoxycholate 0.5%, Triton X100 1%). J'ai d'abord fait un test en réalisant des gammes étalons de BSA diluée dans différentes solutions (RIPA, RIPA dilué au 1/3 dans de l'eau distillée, eau distillée).  [...] La gamme en H2O marche très bien. J'ai également testé avec du RIPA prêt à l'emploi de chez sigma pour éliminer d'éventuelles erreurs de préparation, même résultat que pour le RIPA fait maison. Avec du RIPA dilué au 1/3 dans l'eau distillé j'obtiens un résultat intermédiaire.  [...]

[Biochimie] Protéine et Absorbance

Mais le problème est que je ne sais pas du tout comment trouver la quantité de protéine à partir de l'absorbance et de quantité de BSA, eau et réactif de Bradford.  [...] Il y a effectivement une relation entre absorbance et quantité de protéines. mais il y a un facteur. Que tu n'arrives pas à trouver la formule liant absorbance à quantité de x me parait bizarre. Tu dois mal faire tes recherches (pas un reproche, juste une constatation).  [...]

[Biochimie] Détermination d'une concentration et d'un degré de pureté

On a dosé la B-galactosidase par la méthode BCA en utilisant la BSA comme protéine standard (ou étalon). Bref après préparation des diverses solutions étalon de BSA et des deux solutions de B-galactosidase (0.1ml d'enzyme + 1.4ml d'eau pour le tube 1 et 0.  [...] 2ml d'enzyme + 1.3ml d'eau pour le tube 2) on mesure l'absorbance des solutions et on trace le graphique (f(A)= masse BSA), on trouve 0.09µg de BSA donc de B-galactosidase (problème d'absorbance pour le tube 2 du coup on ne garde que le tube 1).  [...]

determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

en utilisant les Absorbance spécifique à l'acide urique produite pendant les 10mn de réaction comment calculer l'activité spécifique de cette protéine en nmol d'acide urique/min mg de proteine.   [...] pour calculer la concentration de l'acide urique produite par minute on divisera l'absorbance par le coefficient d'extinction molaire de l'acide urique divisé par 10mn. donc on aura la concentration en mmolaire/l mn multiplié par le volume de l'échantillon.   [...]

[Biochimie] Dosage de protéine / méthode de lowry

Je mesure à 680, mais de toute facon je pense pas que ca fasse de grande différences. On est en plein dans le rouge à cette longueur d'onde, donc pour du bleu c'est pas mal, et puis de toute façon vaux mieux faire ce qu'on dit dans ces cas là. Les mecs qui ont mis au point cette technique on fait énormément de tests pour trouver la meilleur (qui n'est pas forcément celle ou cela absorbe le plus).   [...] La BSA est généralement la protéine standard qui possède tous les aa en quantité relativement représentative des autres protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon SSC 20x

Tout dépend du produit... il y a certaines poudres (par exemple, la BSA) qui vont très mal se dissoudre si on verse une grosse quantité d'un coup, alors qu'en ajoutant progressivement cela ne pose pas de problème. Il faut attendre que ce que l'on vient de mettre soit dissout avant d'en ajouter.  [...] Pour le pH, je ne l'ai pas fait après avoir mis 900ml car il y avait vraiment beaucoup de cristaux en agitation (aspect laiteux). Mais dans 2L d'eau, le pH était autour de 3,5 et j'ai passé une bonne cinquantaine de pastilles de soude pour le ramener à 7,2.  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

Car c'est surement une mauvaise lecture de ma part, mais en te lisant j'ai eu l'impression que tu voulais une gamme pour relier directement a une quantité en ng ou nmol initiale de ton gène, un peu comme en biochimie on prépare une gamme de BSA pour obtenir une concentration de protéines.  [...] relier ton Ct aux Ct d'ADN de concentration connu je ne suis pas sur que cela puisse se faire puisque x ng ou x nmol ne représente pas une quantité de transcrit (selon la taille des fragments), en plus de ca, dans les quantifications, les nucléotides libres sont aussi pris en compte, les primers aussi.  [...]

[Biochimie] [TP Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne] Niveau L1S1

On a ensuite dû prélever 20micro litres des fractions 1 à 11 (la dernière contenant les dernières molécules de cytochrome c) et d'y rajouter 1mL de bleu de Coomassie permettant de mettre en évidence la présence des protéines. Avec la gamme étalon du BSA, on a pu obtenir la quantité de protéine pour ces fractions, en micro g.  [...] ..Tu n'as pas de courbe de Gauss à tracer Si non tu n'a pas de masse moléculaire à déterminer donc tu divises m du cytc en g par 12400 tu fais pareil avec le théorique et tu divises la quantité expérimentale sur celle théorique tu multiplies par 100 et tu as ton rendement =).  [...]

[Biologie Cellulaire] Au secours : Pb à la décongélation de cellules

Il y a une rumeur au labo comme quoi PAA aurait dilué son SVF avec de l'eau et ajouté de la BSA pour donner le change (on tient ça d'un autre fournisseur, donc a prendre avec des pincettes)... Maintenant je sais pas trop si ça joue vraiment sur la congélation.  [...] Quand as tu fait cette décongélation Si c'est le jour où tu as posté, te stresse pas trop pour l'instant et attend un peu. Je saurais pas trop te dire pourquoi mais ca m'est déjà arrivé que des lignées cancéreuses congelées mettent plusieurs jours à repartir.   [...]