• Santé - Puits, Migration, ADN

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

un gel ou le ladder apparait, une fluorescence qui apparait au niveau des puits pu j'ai débosé mes plugs par contre je ne vois pas de migration de mon ADN.  [...] Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel As tu chargé assez d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

- il contient un colorant (bleu de bromophénol, oranger...) qui permet de suivre la migration à l'oeil nu (pour éviter que de faire migrer l'ADN trop longtemps et éviter qu'il ne sorte du gel...).  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Génétique] Electrophorèse-ADN

Sinon en plus du bleu de dépôt, il y a du glycérol dans votre solution afin de faire tomber l'ADN au fond de chaque puits et pour qu'il puisse migrer grâce au tampon de migration moins dense.  [...] L'ADN linéaire migre en fonction de la taille du fragment sans autre ajout. Pour être plus précis, la charge du fragment augmente avec la taille. Les fragments les plus gros devraient donc avoir une migration facilitée. cependant, la résolution du gel freine plus les gros fragments que les petits.  [...]

[Biologie Moléculaire] élèctrophorèse (ADN)

Donc, si tu n'observes pas de bande dans un puits c'est que le poids moléculaire de l'ADN fragmenté n'est pas dans la fourchette de taille observable par le gel d'agarose calibré (autrement dit, ton ADN est tellement petit qu'il a pu passer a travers ce maille et que lors de la migration, il a carrément quitter le gel en migrant vers une électrode).  [...] Par contre, j'ai du mal m'exprimer, ce que je n'arrive pas à expliquer c'est pourquoi à T0 on voit une migration avec nottament une barre près du puits, à T1 la migration est de même longueur sauf que la barre près du puits apparait moins nettement, et à T2 la migration est bien visible aussi mais il n'y a plus de barre tout près du puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorese gel d'agarose

pour faire une electrophorese sur gel d agarose on prend du gel d agarose auquel tu rajoute du bet (bromur d ethidium) on fait un puit dns le gel (dans lequel on mettra l echantillon) on met l ensemble dans une solution (un tempon de migration).  [...] Après migration tu observe une ou plusieurs bandes, tu compare la distance puits/bande à celle de ton ADN à celui du marqueur et tu peu déterminer sa taille.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

Des digestions avec une ou 2 enzymes sont réalisées, les produits de la digestion sont soumis à une électrophorèse. On dtermine pour chaque puits le nombre et la taille des fragments de restriction par comparaison avec la migration de fragments d'ADN de taille connue. Les résultats sont dans le tableau suivant.  [...] Question confuse. Dans un plasmide recombinant on a un vecteur et un insert. L'ADN génomique humain a une taille d'environ 3 000 000 000 Nt. Mais je suppose que c'est la taille de l'insert du plasmique recombinant que tu veux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de migration électrophorèse (produits bloqués dans les puits)

Je dispose de protiste et les amplifications se déroulent correctement sauf ma dernière PCR où, après migration des produits par électrophorèse (gel agarose 1%, 100V, 1h) j'ai eu comme résultats, de nombreux produits apparemment coincés dans mes puits (voir photo jointe).  [...] J'ai vérifié tous mes produits et ils sont tous corrects. Dans le doute j'ai fait une autre migration avec les produits issus d'une nouvelle PCR et je n'ai eu ce problème que sur un seul échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

[Biologie Moléculaire] PCR. dépôts qui restent dans les puits lors de la migration.  [...] -une 2nde nested, pour laquelle le PM attendu est sensiblement le même que pour la 1ere PCR et qui me permet simplement d'ajouter 4nt à mon gène pour le clonage (utilisation d'un kit).   [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

Ensuite, pour tes manips sur gel, pense à mettre un marqueur de taille, c'est un controle indispensable pour pouvoir comparer la migration de tes échantillons avec quelque chose de connu (le marqueur). Cela te permet aussi de détecter tout problème de migration (pas assez ou trop migré par exemple ).  [...] donc à priori ces grosses bandes près des puits seraient de l'ADN Sinon j'ai un doute mais lorsque l'on mesure la DO à 260, on détecte ADN et ARN en même temps donc même en ayant un bon rapport (près de 1.8) ça ne signifie pas qu'il n'y pas de contaminant ADN Ce rapport permet de dire juste s'il y a ou non des protéines. C'est bien ça merci.  [...]