• Santé - Protéines, Points, Migration

[Biologie Cellulaire] Metastase, MMP, intégrines

Les MMP ont une spécificité de dégradation. Elles dégradent certains collagènes, comme le collagène de type IV, qui eux-mêmes peuvent ainsi générer des fragments favorisant l'angiogenèse. Elles dégradent donc les protéines de la matrice extracellulaire qui vont entraver leur migration et pas forcément les aider à migrer via les intégrines.  [...] Je finirais par une petite précision, à creuser chez les MMPs. Certaines sont ancrées à la membrane plasmique. Lorsque la cellule migre, elle est polarisée. Peut-être la cellule se sert de cette polarisation pour placer les MMP membranaire vers l'avant de la cellule, relativement au sens de migration, pour favoriser une dégradation ciblée de la matrice extracellulaire. Ce n'est qu'une hypothèse.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).  [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]

[Identification] Electrophorese et isoelectrophorese

La migration se fait sur un gradient d'ampholines (molécules amphotères) qui créent un gradient de pH. Les protéines migrent jusqu'a rejoindre lur point isoélectrique ou pHi pour lequel leur charge globale nette est nulle.  [...] Donc si j'ai bien compris l'électrofocalisation, l'isoélectrofocalisation et l'isoélectrophorese sont des synonymes et c'est une électrophorese qui se fait dans un gradient de pH. Es ce exact.   [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Ceci entraîne la suppression des structures secondaires, tertiaires et quaternaires des protéines permettant ainsi une fixation du SDS sur ces protéines et donc de les charger négativement (transformation en anions). La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge.  [...] Dans chaque puits il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 90 µl de la fraction membranaire et 100 µl de la fraction cytoplasmique. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La migration électrophorétique ne se fera donc plus qu'en fonction de la masse moléculaire de chaque protéine, étant donné que chacune possède maintenant la même charge. L'électrophorèse a pour but de séparer les protéines sur un gel de polyacrylamide, ensuite ce gel est mis en contact avec une membrane de nitrocellulose et un courant allant du gel vers la membrane ce qui permet de fixer les protéines contenues dans le gel sur cette membrane.  [...] Dans chaque puits, il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 110 µl de la suspension. La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures, en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée.  [...]

[Biochimie] Sds page

Vous pouvez bien entendu faire varier la tension pendant la migration (une pénétration des protéines en douceur dans le gel, suivit d'une migration plus énergique).  [...] Donc pas de migration des protéines. Les ampères ne varient normalement pas beaucoup dans un gel (sauf si celui-ci présente des dépots solides de sels, qui s'assechent...). Bref, si au départ de la migration, les ampères sont normaux, et que à la fin de la migration, ils sont indétectables, c'est que le courant ne passe plus, ou a tellement ralenti qu'il ne fait plus migrer les protéines (ou très peu).  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Non pas à ma connaissance. Pour mes protéines après migration à 80V dans le stacking et 130V dans le separating, je transfère en liquide pendant 1h30 à intensité fixe 350 mA, puis les autres étapes sont inchangées par rapport à d'autres westerns sur d'autres protéines.  [...] Juste pour une grosse proteine, nous on utilise des gels precoules 4-12%. En migrant avec du tampon MOPS. Apres une heure de migration, mes proteines a 250 kD sont environ a 2 cm des puits (le gel fait 7 cm...) donc c'est tres bien.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique Laurière et Western Blot

Il vous faut optimiser votre ampérage/temps de migration afin d'avoir un équilibre grosse protéines transférées/petites protéines perdues.  [...] Vous pouvez également pousser le temps et le courant au maximum pour avoir la totalité de vos grosses protéines et faire sortir complètement vos petites protéines et rajouter une seconde membrane derrière la première pour faire un western sur les deux en parallèle.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles.  [...] Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques.  [...]

[Génétique] Génotype Phénotype souris électrophorèse

Bonjours à tous voilà j'ai un exercice de SVT je n'ai pas de problème à trouver les réponses mais j'aimerais juste connaitre la signification d'un mot dans cet exercice. En effet je n'arrive à trouver ce que signifie ce mot et par conséquent à savoir ce que l'on me demande.   [...] Après application d'un champ électrique, les molécules migrent et sont séparées en fonction de leur taille, et de leur charge. Un colorant révélant les protéines permet de mettre en évidence 3 molécules différentes. La forme L à migration lente, la forme R à migration rapide et la forme M à migration intermédiaire.  [...]