• Santé - Protéine, Transfert, Membrane, Marqueurs

[Biochimie] tampon de lyse

Il me semble que le CHAPS (détergent doux) est utilisé pour récupérer les protéines membranaires car il a l'avantage de solubiliser les membranes sans dénaturer les protéines (à la différence de détergent fort comme le SDS). Le triton 1% est un peu léger seul dans ton cas, il n'a pour effet que de déstabiliser la membrane plasmique provoquant sa rupture.  [...] j'ai lysé mes cellules par un tampon de Karla au Bertin,le tampon renferme dees antiprotéase,PMSF,NAF,EAU,Napp.Je cherche aussi bien des protéines membranaire et du stress oxydative certaine sont cytosolique,c'est bisard j'ai fais un dosage BCA j'ai des concentrations trés faible en protéine entre é 2 et 5 mg/ml mais c'est jouable pour déposer en faisant l'éléctrophorése à la fin du transfert j'ai révéler au ponceau il n'ya pas eu de transfert sur ma membrane et effectivement à la révalation d'une protéine j'ai rien vu au chémidoc alors que les marqueurs ont transférer.  [...]

[Biochimie] Western blot

oui effectivement je pense que tu peux jouer sur le temps et tenter un transfert sur toute une nuit. Les grosses protéines transfèrent mal.  [...] Cependant une personne de mon équipe a réalisé un transfert d'une très grosse protéine (. 300 kDa) et il a un tampon de transfert adapté, pris d'une publie. Il réalise son transfert à 20V à 4°C et a noté une nette amélioration du transfert des marqueurs de haut poids moléculaire comparé aux méthodes classiques.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

La première chose à faire, c'est de savoir si le problème est lié à ta protéine ou au transfert. Il y a des marqueurs de poids moléculaires commerciaux qui vont au moins jusqu'à 250 kDa, il faut donc savoir si dans les conditions de ton gel les bandes du marqueur sont transférées ou non.  [...] Personnellement, j'ai transféré efficacement une protéine de 350 kDa mais ça marche uniquement avec les systèmes de transfert à sec. La bande de marqueur à 250 kDa était elle seulement partiellement transférée dans les systèmes liquides et totalement dans les systèmes à sec.  [...]

[Biologie Cellulaire] RE-Golgi

je voulais vous demander quelle est la différence entre la séquence KKXX et la séquence KDEL.   [...] J'ai cherché un peut sur wiképidia et d'aprés ce que j'ai compris les séquences KKXX et KDEL sont des marqueurs de proteines nécessaires au fonctionnement du RE et qui doivent maturer au niveau de l'appareil de golgi puis retourner au RE. Pour la différence, il est dit que la séquence KKXX marque les proteines membrannaires (membrane RE) et la séquence KDEL marque les proteine soluble (lumiére RE).  [...]

[Biochimie] Western blot en pointillés

Avant je faisais un transfert identique à toi au niveau chimique (PVDF, méthanol sans SDS), 1 heure 30 à 400mA constant. J'avais les protéines de haut poids moléculaire qui se transférait mal vu avec les marqueurs de taille + PARP non clivé (110 kDa). Du coup je suis passé au même transfert mais d'une durée de 2h15-2h30.  [...] Pour PARP, en effet sur une autre lignée cellulaire où elle est bien exprimée, pas besoin d'optimiser le transfert. Mais j'ai une autre lignée où elle est peu exprimée et pour en transférer suffisamment pour qu'elle soit détectable, je dois déposer peu de protéines (20 µg) et transférer longtemps.  [...]

Conjugaison bactérienne et cartographie génétique

On dispose de trois autres Hfr de même génotype que l'HfrA. On les croise avec la F- et l'ordre de transfert des marqueurs par ces Hfr est indiqué ci-dessous.  [...] Question 2. Établir l'ordre des marqueurs génétiques considérés sur la carte chromosomique d'E. coli. Indiquer l'origine et la polarité de transfert de chacun des quatre Hfr.  [...]

Obtention d'un homozygote par transgénèse avec Agrobacterium Tumefaciens

Comment effectuer une transgénèse par infection avec le système T-plasmide/Agrobacterium tumefaciens vers une plante en garantissant que la plante obtenue est HOMOZYGOTE pour le gène transféré.  [...] Les individus homozygotes pour le gène d'intérêt transféré seraient alors ceux porteurs des DEUX marqueurs de sélection (par exemple résistence à la Kanamycine et une protéine de fluorescence).  [...]

Des protéines messagères, clefs du positionnement cellulaire

Agissant dans le noyau, elles ne sont pas supposées en sortir. Or, pour que le marquage positionnel soit utile, il faut qu'il s'exprime à la surface des cellules. Il était donc admis que ces protéines marquent la position de leur cellule en régulant l'expression de gènes codant pour d'autres facteurs qui sont, eux, exportés hors des cellules.  [...] Il y a déjà plusieurs années, les chercheurs de l'équipe CNRS dirigée par Alain Prochiantz à l'Ecole normale supérieure, avaient observé que certains marqueurs positionnels nucléaires étaient également capables de s'échanger entre cellules 2. Ils avaient alors proposé que l'échange d'information de position puisse se faire directement par transfert de ces facteurs nucléaires, rebaptisés protéines messagères.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine actives et code postal (signal).

Les chaînes polypeptidiques, débutent très souvent par une séquence de nucléotides qui seront amenée à disparaître de la protéine par la suite. Après maturation de la protéine, on ne retrouvera plus cette séquence.  [...] Cette séquence caractérise en fait la destination du polypeptide. Il peut en effet soit être exporté, soit être dédié à d'autres organites de la cellule. Par exemple, les protéines dédiées aux mitonchondries portent un signal peptidique reconnu par des marqueurs spécifiques sur la membrane des mitochondries.  [...]

Définition | Lymphocyte T4 - LT CD4+ - LT4 - Lymphocyte T auxiliaire | Futura Santé

Les lymphocytes T CD4+ (en doré sur cette image) jouent un rôle fondamental dans l'immunité cellulaire. La preuve. lorsque le VIH (en bleu ciel) les détruit, les défenses de l'organisme sont réduites à néant. C'est le Sida. R. Dourmashkin, Wellcome Images, Flickr, cc by nc nd 2.0.   [...] Les lymphocytes T CD4+ sont des cellules du système immunitaire dont la prolifération permet de diriger et d'activer d'autres cellules de l' immunité, comme les lymphocytes B, pour éliminer un pathogène. Ils doivent leur nom aux marqueurs protéiques CD4 retrouvé sur la surface de leur membrane.  [...]