• Santé - Protéine, Fusion, Extraits, Cerveau, Souris

[Biochimie] Extraction protéine de cerveau pour IP

je souhaiterai faire une IP d'une protéine en fusion avec MBP et des extraits protéiques de cerveau de souris.  [...] Je souhaiterai savoir si vous auriez un protocole d'extraction de protéines à partir de cerveau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

j'essaye de produire une protéine en fusion avec la GST afin de faire des tests d'interaction pull-down avec des extraits cellulaires.  [...] Je souhaite donc fixer ma protéine en fusion en GST sur une colonne pui ensuite faire passer mes différents extraits cellulaires afin de déterminer des éventuels partenaires de ma protéine.  [...]

[Biochimie] anti LC3 humain aucun marquage en Western blot

J'ai essayé avec du cerveau de souris (censé etre un bon temoin positif). Toujours rien à la bonne taille. La technique de western n'est pas en cause car le marquage actine est impecable. Le LC3 est sensible à la degradation, donc les extraits sont realisés en presence d'inhibiteurs de proteases.  [...] Merci LXR, cet ab fonctionne en WB contrairement au premier que j'avais utilsé. J'ai fait un premier essai avec du cerveau de souris et j'ai bien un signal a 16-18kDa. Je ne distingue pas les deux isoformes sur mon premier essai mais je vais augmenter le % de PA.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Tu précipites tes protéines Tu les reprends dans quoi C'est des protéines de quelle provenance (Extraits nucléaires, humain, souris...).  [...] alors voila, je prépare 60 millions de plaquettes (volume de 200-400µl). après traitement je fais une extraction du cytosol total grâce à un kit Active Motif. Ensuite je dénature 5µg de protéines (environ 10µl) par 5µl de tampon de charge (5min à 100°C). je fais ensuite migrer mes échantillons dans un gel 10% pendant environ 2h, grâce à une système Apelex (cuve + générateur).  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

Une autre possibilité est que tes bactéries rejetent ta protéine dans des corps d'inclusions. Pense à bien soniquer tes extraits si tu ne le fais pas déjà sinon tu ne trouveras jamais ton graal.  [...] .. Ce qui signifie qu'il y a beaucoup de dégradation ou peu de production (je n'ai presque pas de corps d'inclusion, j'avais traité les différents culots issus des extraits bruts) mais que la protéine est soluble.  [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

A priori je dirai immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), dont le principe consisite à fixer la séquence d'ADN à laquelle tu t'intéresse sur des billes d'une colonne de chromato, puis à faire passer dans cette colonne les protéines dont tu suspectes la liaison à la séquence considérée. Après élution, tu récupères la protéines liée.  [...] En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment savoir qu'un ARNm est entier ?

Un anticorps en western blot donne rarement qu'une seule bande, sauf si l'on dépose la protéine recombinante. Donc qu'as-tu déposé, des extraits (de tumeurs, de cellules surexprimant ta protéine après transfection d'une construction la codant,...), la protéine recombinante.  [...] Si ce sont des extraits que tu as déposé, les autres bandes sont soit du non spé, soit des formes modifiées de la protéine comme des phosphorylations qui peuvent provoquer d'importants shifts de migration, soit des isoformes mais pour moi ce n'est pas la première piste à explorer.  [...]

Un beau Nobel de médecine pour la lutte contre les fléaux parasitaires

Youyou Tu a travaillé sur des textes anciens et des remèdes traditionnels et produit des centaines d'extraits de plantes qui ont ensuite été testés par son équipe. L'un des extraits de Qinghao ( Artemisia annua ) a fortement inhibé le parasite chez des souris.  [...] Mais les résultats n'étaient pas reproductibles et il a fallu améliorer le processus d'extraction. En 1972, l'équipe a obtenu la substance pure appelée Qinghaosu (le principe de Qinghao), couramment appelée artémisinine en Occident. La structure de cette molécule était particulière et ne ressemblait à aucun antipaludéen de l'époque.  [...]

Pb sur un exercice sur l'ADN

Par des méthodes chimiques, on extraits des souris S un acide nucléique,l'ADN. Cet ADN est mis en contact in vitro, avec des bactéries R.Ces dernières sont injectés à des souris. chaque souris meurt de pneumonie et on retrouve dans son corps des bactéries S.  [...] pour la question 2, je pense qu'il faut sité les témoins utilisés pour l'expérience. il faut d'abord un lot de souris non infectées avec des bactéries, elles sont saines. ensuite il faut un lot avec les bactéries S (qui vont mourir)et un autre avec les R (qui seront saines).  [...]

[Biochimie] Casser des aggrégats

Tu dis que la protéine que tu veux voir forme des aggrégats mais cela dans des extraits cellulaires. A moins que des aggrégats ne se forment que dans des extraits de cellules surexprimant ta protéine et pas dans des extraits ne la surexprimant pas, tu ne peux pas dire que ces aggrégats sont ta protéine.  [...] En effet, la chaleur induit fréquemment la formation d'aggrégats pour les protéines surexprimées. Je pensais que ces aggrégats étaient visibles dans ton extrait cellulaire mais d'après ce que tu me dis tu les retrouves plutôt sur ton western donc ce n'est pas l'ADN.  [...]