• Santé - Produit, Concentration, ADN

[Biologie Moléculaire] optimisation dHPLC

J'utilise la dHPLC pour identifier des mutation sur les exon d'un gène. J'aurais aimé savoir sur quels facteurs il est possible d'intervenir pour diminuer les épaulements que j'obtiens lorsque je passe mon témoin (adn sans mutation) j'ai déja essayé de diminuer la concentration en MgCl2 lors de la PCR mais j'ai peur que si je la réduit encore je n'obtienne plus de produit PCR.  [...] Essaie peut-être de purifier ton produit de PCR sur colonne de kit avant Ou de travailler avec des enzymes proofreading pour éviter d'avoir des sous-produits mutés.  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

En réalisant une électrophorèse sur la purification obtenue, on obtient les concentrations finales des fragments (dont le 5'gai de pCRgai, estimé à 5ng/µl, ce qui est peu), en comparant la luminosité des bandes.  [...] Les autres ne sont pas ceux dont tu as besoin. Donc, il n'est pas nécessaire de multiplier la concentration de l'ADN plasmique par le nombre des fragments théoriques (5484/784).  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Les cellules de Ecoli et l'ADN plasmidique interagissent de façon productive en présence d'ions calcium et à base Température (o-5°C).  [...]

Variation de la concentration d'ADN dans les tubes de plastique?

Allo, j'ai un problème à résoudre. Je fais des expérience sur des tubes en polypropylène pour l'entreposage de l'ADN génomique à 4°C et j'ai remarqué que dans le temps la concentration de mon ADN varient. Lorsque mes tubes ont été préalablement autoclavé, j'ai une perte que a de 20 à 50% de la contration de mon ADN.  [...] J'ai déjà essayé une marque de tube supposément low binding, mais la concentration de mon ADN dans ses tubes varie quand même. Est-ce que tu aurais des suggestions de fournisseurs à me proposer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de migration électrophorèse (produits bloqués dans les puits)

J'ai lu divers avis sur ce problème et certains explique ce blocage des produits par une sur-concentration d'ADN dans les puits.  [...] J'ai donc essayé de diluer de moitié ces échantillons purifiés (kit Quiagen) (concentrations entre 50 et 80 µg.ml-1, rapports A 260/280 entre 1.66 et 1.9), mais les produits restent coincés dans les puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb migration ADNg sur gel

Lorsque j'extrais l'ADN à l'aide d'un kit (FastDNA kit), je dose (prenons l'exemple d'un tube, DO=0,127 d'où une concentration de 317,5µg/mL d'ADN). Je dépose sur un gel d'agarose 0,8% 5µL d'ADN + 2µL de bleu de charge.  [...] Dans le cadre d'un projet, nous avons extrait de l'ADN d'un sol avec un kit d'extraction puis nous avons amplifier un gène spécifique à l'aide d'une PCR et enfin nous avons fait migrer les produits de PCR sur gel d'agarose avec plusieurs concentrations.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Ensuite grâce aux cycles critiques des 4 génes que tu étudies tu peux retrouver grâce à la courbe la concentration initiale en ADN pour tes 4 gènes.  [...] Tu compares juste tes échantillons entre eux avec pour conclusion quelque chose du genre la concentration en ADN de tel échantillon est 10 fois plus élevée que dans celui-ci.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage de l'ADN

La concentration d'une solution d'ADN est déterminé par spectroscopie UV. La valeur de DO mesurée est de 0.456. Parmi les propositions suivantes, quelle est la seule proposition fausse.  [...] Beh si le simple-brin absorbe davantage et qu'avec les calculs plus haut tu trouves que tu as une concentration d'ADN correspondant a de l'ADN natif, la DO devrait augmenter s'il y a denaturation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

En effet après controle qualité au Nanodrop j'obtiens des courbes potables, des concentration environnant les 60-90 ng/microlitre avec des ratio proches de 2 (sauf pour le ration 260/230 pour l'ADN ou j'obtiens quelque chose proche de 0.8.  [...] j'ai essayé d'augmenter la concentration finale de MgCl2 comme dans le cas de non-produit ca peut etre du a une trop faible quantité de Mg, ducoup jsuis passé de 1.5 a 2.5 (meme si 1.5mM devrait etre suffisant normalement) j'ai aussi augmenté ma quantité de dNTP qui etait 5x inferieur a ce qui était préconisé de 0.  [...]

NanoDrop vs Qubit : quelles valeurs utiliser?

Dans le cadre de mon stage, je suis amené à réaliser une purification de l'ADN extrait de tissus FFPE. Suite à ma purification, j'ai réalisé une mesure de la concentration en ADN et de la teneur en contaminants au NanoDrop, ainsi qu'une mesure au Qubit afin de déterminer la concentration en ADNdb.  [...] J'ai bien compris que le NanoDrop surestime la concentration en ADN, puisque l'ARN absorbe à la même longueur d'onde, raison pour laquelle une analyse au Qubit est indispensable.  [...]