• Santé - Population, Cellules, Marquage

[Immunologie] Cytométrie de flux - Artéfacts

Nous obtenons, comme on s'y attend, une forte population de cellules CD8+/CD4- à cause du marquage simple.  [...] Nous avions pensé à une contamination lors des manipulations mais la plupart des cellules T du thymus étant double positif, le fait que les cellules de cet artefact affichent CD4+/CD8- nous confond.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cytometrie et compensation!!

Si vous analysez un tube de cellules positives en CD45 et négative en CD105 avec un marquage CD45-FITC(+) et CD105-PE(-), vous devriez obtenir toute votre population positive en FL1 et négative en FL2 (visualisation en Dot Plot.). Il arrive parfois que vous ayez des cellules positives en FL2, ceci signifie que votre FL1 bave sur votre FL2.  [...] Pour remédier à cela, il vous faut compenser, c'est à dire rentrer les réglages afin que les cellules positives en FL2 deviennent négatives en FL2.  [...]

[Biologie Cellulaire] Utilisation du FACS

Je vous explique. j'envisage de mener un suivit de populations hémocytaires (cellules immunitaires) au cours de l'infestation de mon modèle (un escargot) par un parasite. avant ça je vais mener pas mal de manip afin de mettre au point la technique (logique).  [...] On arrive a discriminer quatres population en FACS (taille/fluo apres marquage SIBR green) et on a également un anti-corps qui marque une sous population en particulier. On aimerait donc avoir un suivi du nombre de cellules par famille au cours de l'infestation.  [...]

[Immunologie] FACS/cytométrie de flux et interactions cellulaires

L'analyse porte sur différents marqueurs permettant une identification des populations en présence, et de leur(s) état(s) d'activation, et ce par simple ou double marquage.  [...] néanmoins, il y a beaucoup de discussion en cytometrie pour savoir si cette population CD4+CD8+ existe. Certains disent qu`il s`agit de doublets (on peut tenter de le vérifier en diminuant la vitesse d`acquisition), du marquage non spécifique des cellules apoptotiques (intérêt de mettre un marqueur d`apoptose et de faire des régions morphologiques).  [...]

[Biologie Moléculaire] Marqueur spéficique apoptose

Ben justement, c'est pour ça qu'on fait un double marquage. L'annexine-5 va marquer plus ou moins toutes les cellules mortes, et le deuxième marquage à l'iodure de propidium ne va marquer que les cellules en nécrose. Vu que l'IP est un intercalaire, il ne pourra marquer que les nécrosées, puisque l'ADN des cellules apoptotiques est dégradé.  [...] Je travaille sur une forme de mort cellulaire non apoptotique et je confirme que pour distinguer les cellules apoptotiques, des cellules nécrotiques, je fait un marquage annexin V/PI.  [...]

[Biologie Moléculaire] marquage des cellules par Idu et BR dU

Bonjour, je suis en premiere annee de master biologie sante et je voudrais avoir des renseignements concernants le marquage immunologique des cellules par le I dU et le Br dU... merci pour vos renseignements... bonne soiree.  [...] j'aurais souhaiter avoir des renseignements sur la technique qui consiste a marquer les cellules avec Idu et BrDU... quels sont les etapes de ce marquage, de quel façon il s'effectue, sur quel type de cellule specifiquement,quel est le but d'utiliser IDU et BR dU.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

Pour le marquage à l'iodure de propidium, dans le cas d'une étude du cycle cellulaire, on fait une fixation dans l'éthanol à 70% ce qui fait office de perméabilisation pour la pénétration de l'iodure de propidium dans la cellule. Dans le cas d'une étude de l'apoptose avec co-marquage à l'annexin V, on ne fai pas cette fixation à l'éthanol, on met directement les cellules en présence d'iodure de propidium, de RNase A (pour augmenter la proportion d'iodure de propidium se fixant à l'ADN) et l'Annexin V.  [...] Ma deuxième question porte sur le double marquage PI et Ki67 ou PCNA. L'aviez vous déjà fait si oui, faut il forcément faire une perméabilisation au Paraformaldéhyde sachant que mes cellules vont être ou ont été fixées à l'alcool Si vous avez des conseils pratiques, je suis bien disposé à les recevoir.  [...]

[Biologie Cellulaire] Microscope fond rouge?

Pour moi l'image E et F sont des témoins, elles montrent que les cellules sont présentes et on en conclu que le marquage est bien spécifique. Les images ont été prises à la lumière blanche contrairement aux images A, B, C et D où les cellules ont été excitées à une certaine longueur d'onde.  [...] Ensuite avec une lumière excitatrice on vient révéler le marquage des cellules (images A, B, C et D). Sans ces témoins, on pourrait se dire qu'il y a aucune cellule sur l'image A or c'est faux, ce qui montre bien la spécificité du marquage et des résultats obtenus.  [...]

Marquage IF de l'enveloppe nucléaire

Sur tissu, le marquage IF est spécifique, beau et correspond à nos attentes. Mais nous ne parvenons pas à le mettre au point sur cellules déposées sur cytospin. Peut-être l'anticorps n'accède pas à l'intérieur du noyau. J'utilise du triton pour la perméabilisation mais ceci n'est peut-être pas suffisant. Si vous aviez des conseils à m'apporter. Merci.  [...] Tu peux peut-être essayer de faire ton marquage sur des cellules adhérentes afin de voir si le cytospin n'est pas en cause. J'avais un marquage qui ne marchait pas sur cellules passées au cytospin, leur morphologie semblait compromise par cette méthode.  [...]

Au sujet des Treg

je voudrai savoir pourquoi lorsqu'on veut analyser ( et donc doser ) les Treg on doit utiliser pas seulement les anti corp CD4 CD 25 mais aussi le Fox p3 car j'ai lu qu'il existé des T regs qui sont CD4+ CD25+ mais qui n'exprime pas le Foxp3 et donc en faisant un triple marquage es ce que je ne risque pas de délaisser cette population la qui est aussi T régulatrice.  [...] je voudrai savoir pourquoi lorsqu'on veut analyser ( et donc doser ) les Treg on doit utiliser pas seulement les anticorps CD4 CD 25 mais aussi le Fox p3 car j'ai lu qu'il existé des T regs qui sont CD4+ CD25+ mais qui n'exprime pas le Foxp3 et donc en faisant un triple marquage es ce que je ne risque pas de délaisser cette population la qui est aussi T régulatrice.  [...]