• Santé - Plasmide, Sites, Restriction

Carte de restriction

Idem avec le plasmide B pour générer les 3 fragments, en supposant qu'on utilise la même enzyme de restriction pour les 2 plasmides Où se situe le site de restriction surnuméraire et à quoi cela correspond-il concernant la mutation.  [...] Je ne vois pas en quoi une représentation linéaire d'une carte de restriction diffère de celle en représentation circulaire. Prenons un exemple concret où le 1er site de restriction se situe en position 278 sur le plasmide circulaire et le second en position 778 dans le premier cas de figure.  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

- digestion sur les sites de restriction et insertion dans un plasmide commercial également aux sites de restriction.  [...] 4) Je n'ai pas le temps de lire le papier, mais en général le plasmide contient un promoteur qui permet une expression plus ou moins forte de ce qui se trouve derrière. Ca dépend du tissu cible, de si on veut une expression constitutive ou inductible, etc.  [...]

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

Egalement (je demande beaucoup aujourd'hui et je le sais), si un professeur pourrait m'envoyer des exercices sur la reconnaissance de ces plasmides, ainsi sur ce qui est PCR, surproduction de protéine dans un système hétérologue afin que je puisse m'exercer.  [...] Ces deux types de plasmides ont des caractéristiques communes et des différences. La simple carte de restriction, qui présente les sites de restriction (généralement limitée aux sites présentes une seule fois dans le plasmide) ne suffit pas à les distinguer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

J'ai une question en ce qui concerne le clonage avec un plasmide, j'ai cru comprendre quelques trucs mais j'ai peur de m'embrouiller avec la PCR en ce qui concerne les enzymes de restriction.  [...] je crois que je confonds les sites de restriction présent sur le plasmide et les enzymes de restriction que l'on ajoute aux amorces pour faire la PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Enfin, par simple clonage, on insère le résultat de cette pcr dans le plasmide initial grâce aux sites de restriction unique.  [...] Ce qui permet d'amplifier deux segments qui doivent chacun contenir un site de restriction unique dans le plasmide (attention, différent du site qu'on désire insérer évidemment). La aussi je suis perdue, je comprends pas, l'histoire du site de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Numérotation des sites de restriction

Bonjour à tous j'aimerais savoir comment on numéroté les sites de restriction sur un plasmide. Je dois numéroter les sites de restriction de l'insert d'un plasmide recombinant et je ne sais pas comment faire. Merci d'avance pour la réponse.  [...] la numérotation correspond au premier nucleotide du site de restriction. Le 0 est généralement donné sur le plasmide. sinon il est pris de maniere arbitraire.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

Ce que je comprends c'est que vous avez fait une mutagénèse dirigée par PCR à partir d'un plasmide X. Pour éliminer le plasmide matrice X vous avez utilisé la spécificité de l'enzyme de restriction DpnI pour les sites méthylés. Ainsi, l'enzyme a digéré le plasmide matrice, produit en bactérie (donc méthylé) et pas le plasmide produit par PCR, non méthylé.  [...] Pour vérifier une mutagénèse sur un petit insert (d'un ordre de grandeur inférieur au 10Kb) le plus simple est de faire quelques restrictions et un séquençage. Vous n'avez pas fait de séquençage du Bluescript.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée qui ne fonctionne pas

Voilà, j'ai un plasmide de 10Kb dans lequel je souhaite insérer 3 nucléotides à un endroit bien particulier pour créer un site de restriction. Une fois ce site de restriction présent j'insèrerai mon tag Flag. L'un des points limitant c'est que je souhaite insérer flag dans une boucle extracellulaire courte de ma protéine finale.  [...] 3) Si mes primers les plus extrèmes contenant les sites de restriction uniques du plasmide ont leur séquence commençant directement par ces sites de restriction uniques, y a t-il trop de risques qu'ils soient modifiés (et donc que je perde mes sites de restriction) par une enzyme qui perdrait de sa fidélité justement là où je veux pas.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

On digerait alors le plasmide et l'insert par des enzymes différentes A et B générant des sites de restriction non compatibles.  [...] ici le plasmide a deux sites de restrictions différents mais identiques aux deux sites de reastriction de l'insert je ne sais pas si j'ai été claire en gros.  [...]

plasmide et BAMH1

Il suffit maintenant de se rappeler que le plasmide est circulaire. Tu as un cercle (et pas une droite sinon ça fait 4 fragments) que tu coupes 3 fois =. tu obtiens trois fragments. un issu à 100% du gène inséré et les deux autres qui contiennent un bout du plasmide et un bout du gène inséré.  [...] Et l'intérêt est là. tu cherches parmi tes plasmides lesquels sont recombinants et lesquels ne le sont pas. Tu as ton plasmide, tu le mets avec l'enzyme et tu fais une petite électrophorèse. si tu as 1 seul gros fragment, ton plasmide était sans le gène, si tu en as 3, le plasmide contenait le gène.  [...]