• Santé - Plasmide, Séquence, Question

génie génétique

Pour répondre à la question initiale. On réalise d'abord des cultures de bactéries présentant des séquences palindromiques (je ne sais pas l'écrire) genre. GCTGAT ou un autre bien sur, mais qui soient complémentaires (l'image du tétris citée me plait assez) du gène à insérer de tes deux bouts.  [...] Pour répondre mainteant à la question (ouf), tu peux réaliser une cartographie de restriction puis sortir ta petite calculette pour vérifier si ton plasmide à intégrer ta séquence en sens ou antisens.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dominant négatif

bonjour tout le monde, est ce que quelqu'un peut m'expliquer comment ça marche concrètement une expérience de dominant négatif j'ai ma lignée cellulaire ou je veux éteindre ma protéine, je les transfecte à l'aide d'un plasmide contenant la séquence mutée et je la trouve ou cette séquence et le plasmide ça s'achète ma question est peut être bête mais je n'ai jamais fais ça alors j'ai besoin d'éclaircicements, merci.  [...] Où trouver un dominant négatif Soit il est déja caractérisé dans la littérature, auquel cas tu peux contacter le labo qui a publié pour avoir le plasmide, ou bien il est commercialisé, sinon, il faut le faire. La ce sera de la mutagénèse dirigée, mais concernant le site à muter, cela dépend de la fonction de ta protéine que tu souhaites éteindre.  [...]

[Biochimie] insertion de séquence chez des eucaryotes

Petite question. Lorsque l'on introduit une séquence (par exemple dans un plasmide) pour l'amplifier dans une bactérie, je vois bien comment ça marche, mais pour les eucaryotes, comment fait-on pour insérer une séquence dans le noyau et pas seulement dans le cytosol A part la micro-injection, je vois pas très bien.  [...] On transfecte un plasmide par différentes techniques (lyposomes, CaCl2...) et l'ADN trouve tout seul son chemin une fois dans la cellule. Et je pense pas que ce soit en rapport avec la division cellulaire car les cellules que je transfecte CaCl2 en GFP deviennent fluorescente 4h après mais c'était une bonne idée ^^.  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

en plus il faut pour ca que. L'efficacité PCR doit être la même sur le standard ou sur les échantillons. l'efficacité (que j'appelle E dans le message précédent) ne sera pas la même dans ton standard (une seule séquence, correspondant un certain nombre de tes primers) et dans tes echantilons (plusieurs variants de séquence donc plus de fixation et d'amplification).  [...] J'ai simplement le nom de la souche, comment je peux commander le plasmide linéarise contenant la séquence cible avec une concentration connue.  [...]

Sens de lecture d'un plasmide

Je tente de faire une construction à l'aide d'un programme et j'ai trouvé la séquence de mon plasmide. J'ai repéré les sites de restriction à utiliser qui seront de part et d'autre de mon gène.  [...] Seulement je me pose la question de l'orientation de mon gène. Tout d'abord comment savoir où se trouve le 5' et où se trouve le 3' du plasmide J'ai une séquence qui est numérotée de 1 à 5369. Le 5' commence toujours en 1.  [...]

[Microbiologie] cure plasmidique

Ce qui veut dire que l'on a une cure plasmidique et que la kanamycine possédait les même séquences d'incompatibilité que le plasmide tétracycline d'où sa suppression. Le problème c'est que sur un des antibiogrammes on observe des repousses, ce qui sous-entend la présence de mutant.  [...] Ma question c'est. est-ce qu'il est possible que le gène de résistance à la kanamycine présent chez la receveuse soit un élément transposable Que de ce fait le transconjugant possédant le plasmide avec la tétracyline et le plasmide avec la kanamycine (élément transposable) est pu faire une transposition de son gène kanamycine sur un autre plasmide présentant donc une séquence d'incompatibilité totalement différente du plasmide avec la tétracycline et soit donc conservé par le transconjugant Ce qui pourrait expliquer les mutants C'est peut-être un peu tiré par les cheveux.  [...]

[Biologie Moléculaire] conversion d'un plasmide

En fait la question est surtout sur la distance entre l'ori et le marqueur car dans tous les plasmides que j'ai, et que j'ai vu, il y a toujours une distance entre les différents éléments du plasmide. Or ici je veux essayer de garder le plus possible la séquence d'origine.  [...] tu peux songer a foutre une origine de réplication virale type SV40 par contre je sais ce que ca donne en système de production.   [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation chez la bactérie ?

Si ca n'est pas n'est pas un plasmide, il peut être intégré de facon site-spécifique, si l'ADN en question contient une séquence particulière homologue de certaines régions du chromosome bactérien (attention, ca n'est pas un crossing-over. ce terme est réservé à la recombinaison homologue lors de la méiose chez les eucaryotes uniquement).  [...] oui c'est à peu près ca. ca va rajouter la séquence en plus. des fois, ca grignote des morceaux en plus, c'est pas un truc bien propre, non plus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'ai la séquence complète du plasmide, mais je ne sais pas quelle est la séquence du promoteur bla (oui c'est celui-ci qui m'intéresse). Je sais juste où débute le codon start du gène bla.  [...] Vous avez la séquence du plasmide. J'imagine que sur la carte vous devez avoir les limites de votre cassette ampi (promoteur et séquence codante). Y a qu'a compter pour trouver la séquence de votre promoteur sur votre plasmide.  [...]

Séquençage de l'ADN

Ah je crois que j'ai compris ce que tu veux dire. en gros on accroche la séquence inconnue sur une autre connue (plasmide par exemple) et du coup on peut synthétiser la 1ère amorce complémentaire du plasmide et comme ça le séquençage va se poursuivre dans notre séquence inconnue.  [...] S'il est obtenu par PCR, ou par digestion enzymatique (sauf blunt) par exemple, on sait dans quel sens il sera inséré dans le plasmide. Si on fait du séquençage total (comme WGS par ex), on s'en fout un peu puisqu'il y aura, après reconstitution, des séquences codantes sur les deux brins.  [...]