• Santé - Plasmide, Sens, Intégration

[Génétique] Intégration ADNc

je ne comprends pas pourquoi le fait d'utiliser deux enzymes de restriction lorsque l'on veut insérer un ADNc dans un plasmide permet de contrôler le sens d'intégration de cet ADNc.  [...] Maintenant si tu coupes les deux bouts avec la même enzyme, tu auras des deux côtés les mêmes sites donc ton brin pourra s'insérer dans n'importe quel sens. En coupant avec deux enzymes, on a un site spécifique pour chacun des bouts, on peut donc décider dans quel sens sera intégré le morceau d'ADN dans le plasmide.  [...]

Intégration dans un plasmide

Et uniquement in vitro L'intégration d'un gène (dans un plasmide) qui a réussi a pénétré dans une bactérie ne peut se faire qu'in vitro.  [...] C'est pour cette raison qu'on utilise un vecteur d'ADN circulaire pour introduire un gène dans une bactérie. Ce vecteur est souvent un plasmide modifié (avec de nombreux sites d'intégration possibles, un promoteur fort avant ces sites, des gènes de sélection pour pouvoir distinguer les bactéries qui ont intégré le plasmide...).  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

4/ Selection des drosophile GMR-GAL4 à l'aide d'une exposition à l'amphiciline. Les drosophile transgenre GMR-GAL4 résistante à l'Amphicilline = intégration du plasmide.  [...] 4/ Sélection des drosophile GMR-GAL4 à l'aide d'une exposition à l'amphiciline. Les drosophile transgenre UAS-LAcZ résistante à l'Amphicilline = intégration du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Attention, l'extinction par le shRNA n'est stable que s'il est intégré dans le génome de la cellule hôte. Lors de la transfection de shRNAs, leur séquence est présente dans un plasmide. Leur expression est donc transitoire s'il n'y a pas intégration du plasmide dans le génome.  [...] Pour la notion d'intégration au génôme, ce n'est aps toujours le cas, cela dépend du plasmide utilisé. Moi j'utilise des plasmides EBV épisomaux pour exprimer des shRNAs, donc pas d'intégration nécéssaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Donc en gros tu aura une expression stable grâce à une intégration, ou une expression transitoire (3-4 jours max) sans intégration du plasmide dans le génome de la cellule.  [...] Des séquences contenues au sein d'un plasmide peuvent s'intégrer par recombinaison homologue dans l'ADN génomique d'une cellule eucaryote. Ce procédé peut être réalisé avec une transfection classique suivie d'étapes de sélection (G418 le plus souvent) sur plusieurs semaines pour sélectionner les clones stables. on parle alors de transfection stable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide génie génétique

Le polylinker est une région contenant de nombreux sites de restriction qui vont permettre l'intégration de l'insert dans le plasmide.  [...] Le gène LacZ est souvent présent dans le plasmide pour sélectionner les plasmides contenant un insert. Dans ces cas là, le polylinker est présent dans le gène LacZ. L'intégration d'un insert au niveau du polylinker a donc pour effet d'invalider la beta-galactosidase.  [...]

proteine ou cellule stable ???

les protéines peuvent adopter plusieurs états conformationnels, avec des états plus stables que d'autres, et il est communément admis que la formation de complexes protéiques (protéines interagissant entre elles) peut stabiliser (ou déstabiliser) la protéine dans un état conformationnel donné.   [...] ii) transfecter stablement avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt et un gène de résistance, on ajoute un agent de sélection, donc seuls les cellules qui possèdent le plasmide survivent, et au final, il y aurait intégration du plasmide dans le génome.  [...]

[Microbiologie] comment choisir les AMORCES ?

je sais qu'il faut utiliser une amorce sens et une autre anti sens pour vérifier l'intégration chromosomique d'un gène. l'information que j'ai eu c'est que je dois dessiné un primer sur la fin de ce gène et un autre sur le début afin de confirmer l'intégration chromosomique du gène.  [...] SVP Comment choisir les amorces dans la séquence leur taille et comment arriver a dessiner ces primer.   [...]

[Génétique] ADN polymerase

Non à ma connaissance les ADN polymérases fonctionnent toutes dans le sens 5'-. 3'.  [...] Ensuite, les fragments PCR ainsi formés sont utilisés pour une intégration dans un plasmide ouvert qui porte une base U 3' sortants. Est-ce qu'une ligation est possible et spécifique losque la complémentarité entre l'insert et le plasmide vient seulement d'une seule base.  [...]

[Biologie Moléculaire] Proteines recombinantes

Dans un premier temps E.coli va croître dans un milieu sans lactose et en présence d'ampicilline. Cela permet d'éliminer les bactéries n'ayant pas intégré le plasmide recombinant (et donc le gène de résistance) et d'obtenir les bactéries d'intérêt, sans transcrire la beta-galactosidase et la chaine d'insuline.  [...] Les protéines n'ayant pas intégré le plasmide vont donc crever, on ne fait rien avec. Pourquoi toutes les bactéries n'intègrent pas le plasmide Pas vraiment de réponse, ça dépend de beaucoup de choses, c'est un peu comme les transfections pour les cellules eucaryote, tu n'as jamais 100% d'intégration et tu dois valider tes transfections.  [...]