• Santé - Plasmide, Protéine, Système

Systeme d'induction???

J'ai développé un plasmide qui exprime une protéine mais inductible par un système Tet-OFF. J'aimerais connaitre d'autres systemes d'inductions qui existent pour les comparer.  [...] Tu as le système Cre/Lox, les inducteurs par ions métalliques, par hormone, par température ou ph, etc.  [...]

Anticorp et protéines

dans le cadre d'un essai vaccin j'ai transfecter dans un parasite un plasmide recombinant ( qui contient un antigène ) afin qu'il en produise une protéine pour que le système immunitaire se déclenche, mais quelqu'un peut-il m'éclairer sur ce qui se passe une fois la protéine produite.  [...] Oui mais ma protéine elle ne présente pas d'antigène c'est sa que je comprend pas comment il peux y avoir un complexe antigène/anticorp sachant que ma prot' ne présente pas d'antigène.  [...]

Hépatite B

Dans un de mes cours, j'ai vu que le vaccin pour l'hépatite B est un vaccin viral inactivé à sous-unité recombinante -. insertion du plasmide contenant le gène codant pour la protéine dans un système d'expression cellulaire (levure, bactérie, baculovirus) permettant l'expression in vitro de la protéine. Ex. le vaccin HBVAXPRO 10 µg de Sanofi.  [...] Et dernièrement, certains ont fait des tests avec des vaccins à ADN nu pour les porteurs chroniques de l'hépatite B. Vaccination par ADN (ou ARN nu). introduction directe dans certaines cellules de l'organisme du gène codant pour l'antigène vaccinal (plasmide contenant le gène pour le peptide antigénique).  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Puisque je produis moi même mes protéines je peux les associer à un polyhistidine (plasmide type pET) et faire une colonne avec du cobalt ou faire un système GST (là je ne connais le nom des plasmides). Je reprends la colonne d'affinité mais je m'affranchis des spécificités de la protéine.  [...] ce sont des systemes acellulaires, qui ne contiennent quasiment que des ribosomes (et de la globine). Cela permet de faire de la traduction in-vitro et donc de synthetiser une proteine en fournissant un ARNm (il existe des systemes traduction/transcription couplés).  [...]

Vaccins antigrippaux : la génétique inverse et les cultures cellulaires | Dossier

Par la suite, des systèmes de génération de virus influenza A à partir de huit plasmides ont été développés. Chaque plasmide contient une copie d'un des huit segments de l'ARN viral. l'ADNc est inséré entre le promoteur et le terminateur de pol I. cette unité de transcription est encadrée par le promoteur de pol II (ARN polymerase II) et un signal de polyadénylation (signal de fin de gène).  [...] un système à deux plasmides basé sur pol II. un plasmide pour la transcription de PA, PB1, PB2. chacune des trois unités de transcription contient l'ARNm codant pour la protéine virale, intercalé entre le promoteur de pol II et une séquence de polyadénylation.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

Je sais que chez E-coli, il existe un tag SsrA (11 a.a) qui est reconnu par des protéases comme ClpXP et ClpAP. Donc si je clone une protéine-SsrA et une de ces protéases dans une levure, est ce que cette protéase ne dégradera que ma protéine-SsrA Je sais qu'on ne peut pas prédire la réponse à l'avance, il faudrait voir si une levure exprimant cette protéase est viable, mais vous voyez l'idée et ce que je veux faire.  [...] De plus, ils surexpriment Arc via un plasmide, ca ne m'etonnerais pas qu'ils sur expressent Arc au point de saturer le systeme et donc d'avoir pas mal d'Arc soluble et dans le cytoplasme. Du coup la degradation initiale est probablement juste la degradation de la proteine soluble.  [...]

Technique du Double Hybride

Malheureusement comme explique ci-dessus tu as 99% de faux positifs, par exemple toutes proteines interagissant aspecifiquement avec l'ADN (proteines basiques) vont activer ton systeme. Ensuite tu as beaucoup de tests de verif a faire, (chasse du plasmide, croisement pour verifier que c'est bien ton plasmide qui active les systemes rapporteurs).  [...] Il faut que la banque que tu cribles soit representative, cela implique l'analyse de milliers de clones (selon la taille du genome), ensuite si tu cherches par expl a etudier les interactions avec des proteines membranaires la tu est mal, car dans le systeme 2H les proteines sont ciblées dans le noyau (comme l'indiquait igothigh), or une proteine membranaire surexprimée dans le noyau ca risque de s'agreger de de tuer ta cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

Pour m'assurer que ma protéine est fonctionnelle je dois insérer la séquence de mon cDNA du codon ATG au codon stop… jusque là ok.  [...] Mais seul le cDNA suffit à exprimer la protéine nan En considérant biensur que le promoteur soit déjà dans le plasmide Parce que en fait je ne comprends pas bien l'histoire de l'intron avant l'ATG.  [...]

Intégration de VIH-1 dans la chromatine: la chute d'un dogme.

Ce système fait intervenir un plasmide dans lequel on a cloné une séquence positionnant les nucléosomes afin de reproduire un polynucléosome après assemblage d'histones. Ce plasmide mime l'ADN cible cellulaire.  [...] Une fois le système opérationnel, on a réalisé de l'intégration in vitro sur ce plasmide chromatinisé en présence d'intégrase pure recombinante et d'un pseudo ADN viral.  [...]

[Biologie Moléculaire] différence entre 2 plasmides

Un plasmide d'expression est un plasmide qui une fois entré dans la cellule permet de produire une protéine alors qu'un plasmide reporter est une construction qui va permettre de reporter l'activité de la protéine synthétisée par le plasmide d'expression. Il s'agit le plus souvent d'un promoteur qui répond à la protéine produite qui est donc un facteur de transcription.  [...] Si la protéine se fixe sur le promoteur elle va induire la transcription et la traduction d'une protéine rapporteur le plus souvent la luciférase qui émet de la lumière. L'activité de la protéine testée va donc être rapportée par la quantité de lumière émise.  [...]